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preposizione
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12 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 15:04:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di preposizione Invia a preposizione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
aiutatemi per favore ne va della mia tesi che purtroppo è ferma da 2 mesi su questo cavolo di plasmide che non vuole "mangiarsi" lac.

in sostanza provate tutte, ligazione blunt, poi progetto primer e ligazione stiky. NADA.

per cui mi chiedo se qualcuno di voi avesse esperienza con questo gene e mi sa dire se è tossico o cos'altro.

inoltre io mi chiedevo (dato che con PCR abbiamo verificato che la ligazione c'è ma i batteri trasformati quindi muoiono) se fosse più corretto farli crescere in terreno contenente galattosio anzichè il classico glucosio da piastra.

NB lac codifica per una galattosidasi che è trasportatore di zuccheri ma predilige lattosio e non glucosio.

AIUTOOOOOO

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 15:11:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Potresti spiegare meglio cosa dovresti fare e cosa hai fatto?
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preposizione
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12 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 15:16:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di preposizione Invia a preposizione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
cosa devo fare: CLONAGGIO DI LAC IN PCR8 plasmide di E.coli....

cosa ho provato: excissione di lac da un altro plasmide (taglio blunt) e defosforilazione e ligazione. NADA

attuamente progettazione primer (con all'interno siti di taglio stiky) poi pcr sul plasmide da cui la volta prima avevo exciso lac. digestione con i plasmidi che tagliano nei siti portati dai primer (creo estremità stiky cosi). medesima digestioen del plasmide. ligazione.

morte dei batteri sempre e comunque.

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preposizione
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12 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 15:18:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di preposizione Invia a preposizione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
"con enzimi" non plasmidi...sorry....
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