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Annalisa828
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 11 luglio 2012 : 17:43:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Annalisa828 Invia a Annalisa828 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, sono alle prese con l'esame di tecnologie del Dna ricombinante, mi rifaccio a questo sito perchè sto avendo alcune difficoltà con gli esercizi. Cerco qualcuno che possa darmi una mano per prepararmi in vista dell'esame. Sono disposta a prender ripetizioni. Qualcuno può aiutarmi? Spero proprio di si, perchè al momento navigo in acque parecchio profonde.. grazie.
Annalisa

memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi
Inserito il - 11 luglio 2012 : 17:51:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Annalisa, benvenuta tra noi

prova a postare qui i tuoi dubbi e vedremo di ragionare insieme
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Annalisa828
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 11 luglio 2012 : 18:02:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Annalisa828 Invia a Annalisa828 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Memole.. grazie mille.. è un piacere... mi piacerebbe postare i miei dubbi ma ci sono esercizi che non sono proprio in grado di svolgere... :(
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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi
Inserito il - 11 luglio 2012 : 18:06:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Tu provaci, anche sbagliando, poi li riporti qui e vedrai che insieme troveremo una soluzione.

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Annalisa828
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 14 luglio 2012 : 16:53:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Annalisa828 Invia a Annalisa828 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ok.. facciamo un tentativo.. Grazie mille, davvero, per la tua disponibilità. Non sono molto abile con la PCR ed il clonaggio. Non saprei infatti svolgere esercizi simili:
1) Descrivi una procedura di PCR per mutagenizzare la sequenza sotto riportata nel punto indicato.

5’-ATGAAACCATTCTTCCTCATTTCGAATGCCTGCCACTTCATGGCACATGTTTATCATTGGGGAGTCCGAACCTTCTATAAACAGAAATACTGGGCCGCTTTTTAG-3’

Si vuole eliminare la regione sottolineata.

2) E' stato eseguito il clonaggio del DNA esogeno ottenuto per PCR con i primer plus e minus (sottoriportati) nel sito di restrizione Sma I (CCC/GGG) e del vettore plasmidico Puc19 (268 bp). Proporre una digestione con uno o più enzimi di restrizione per identificare mediante successiva analisi elettroforetica l'orientamento dell'inserto nei cloni ricombinanti. Calcolare inoltre la lunghezza dei frammenti di restrizione che si otterrebbero con i 2 tipi di ricombinanti.
sequenza dell'amplicone:
MINUS 14) Sma I
5’ATGAAACCATCCCGGGTTTCGCTGCTGGTCACGGTCT____________________________________________________________________________________________________________________________________
BamHI
_______________________CTATAAAGGC172)GGATCC_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________335)CTGCAG_______________________________________________________-3’
Pst I PLUS
+ PLUS 5’- ATGAAACCATCCCGGGTTTC-3’
-MINUS 5’-CTAAAAAGCGCTGCAGTATTTC-3’
Gli esercizi mi sono stati dati così. E non sto capendo molto. Grazie ancora per la tua disponibilità.
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Annalisa828
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 14 luglio 2012 : 16:59:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Annalisa828 Invia a Annalisa828 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non doveva vedersi proprio così. La sequenza sottolineata del primo esercizio è: ACATGTTTATCATTGGGGAGTCCGAACCTTCTATAAA
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Annalisa828
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 14 luglio 2012 : 17:06:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Annalisa828 Invia a Annalisa828 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sma I si riferisce alla sequenza CCCGGG scritta quasi sotto di lui
BamH I si riferisce alla sequeza GGATCC
Pst I si riferisce alla sequenza CTGCAG
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