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kachy
Nuovo Arrivato
41 Messaggi |
 Inserito il - 12 settembre 2012 : 11:03:18
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salve a tutti oggi abbiamo fatto una gel elettroforesi per la ligasi utilizzando un vettore ed un inserto,il primo risulta essere più concentrato risp all'inserto, ed il mio obbiettivo è di avere un rapporto pari a 3:1 in favore dell'inserto.
l'inserto pesa 2kB mentre il vettore 6kB, infatti è tre volte più grande.
come ottengo il rapporto in favore dell'inserto?
mi è stato spiegato così ma non ho ben capito: (non ci ho capito molto)
"quindi per fare una ligasi a 3:1, mi basterà mettere lo stesso quantitativo in ng a parità di peso , poichè il vettore è tre bolte più grande in lunghezza, tradotto in molecole, avrò che con una quantità uguale, in ognuno di essi sarà pari a 3 a 1, in favore dell'inserto." 
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kachy
Nuovo Arrivato
41 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2012 : 11:04:53
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ps. mi sono dimenticato:
metterò perciò 3 microlitri di inserto e 0,5 di vettore. |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2012 : 11:21:48
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La formula da usare è:
((ng vettore)x(kb inserto))/(kb vettore)) x (ratio (inserto/vettore)) = (ng inserto)
Nel tuo caso, supponiamo tu voglia far reagire 50 ng di vettore (quantità più o meno standard per una ligation) con una quantità di inserto tale che il rapporto molare (ratio) inserto:vettore sia 3:1. Allora avrai:
((50 ng vettore) x (2kb inserto)/(6kb vettore) x (3/1) = 48 ng inserto
Non ha alcun senso dire che metti 3 uL di inserto e 0.5 uL di vettore se non dici qual è la concentrazione. Cio' che conta é che tu faccia reagire 50 ng di vettore con 48 ng di inserto (puoi approssimare a 50 ng, fa lo stesso).
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2012 : 11:34:03
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Citazione:
Messaggio inserito da roberta.s
Cio' che conta é che tu faccia reagire 50 ng di vettore con 48 ng di inserto (puoi approssimare a 50 ng, fa lo stesso).
Beh in realtà dal conto viene esattamente 50 non 48.
Comunque concordo con roberta, devi ragionare in termini di nanogrammi, quindi ti serve sapere la concentrazione, un volume in microlitri senza sapere la concentrazione non vuol dire niente.
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kachy
Nuovo Arrivato
41 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2012 : 11:42:25
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capito....però per la concentrazione mi hanno solo detto che il vettore è più concentrato rispetto all'inserto...
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2012 : 11:43:54
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Giusto, GFPina, viene 50:)
Per l'utente: ma si tratta di un'esercitazione? O di un tirocinio in un laboratorio? Chiedi a chi di dovere le concentrazioni, non si è mai sentito "più concentrato" :S |
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Ligasi - Gel
Didattica
