Localizzazione recettore [Era: Quesito biologia]

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Biotecgen
Utente Junior

Citt�: Napoli

191 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2007 : 16:05:57

Salve, mi aiutereste a risolvere il seguente quesito:
"Vuoi dimostrare che una certa proteina X � necessaria per la localizzazione di un recettore chinasico Y sugli endosomi e che questa localizzazione � indispensabile per l'attivazione del signaling dipendente del recettore. Spiega in breve quali esperimenti effettueresti per dimostrare ci�."

Io avevo pensato al frazionamento di attivit� e alla cromatografia di affinit�, ma non ne sono per niente sicuro.

Confido nel vostro aiuto.
Grazie

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.

Fil23
Utente Junior

Prov.: estero
Citt�: London

238 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2007 : 16:19:32

Butto la' una idea: attaccare ai geni delle 2 proteine 2 geni reporter diversi, tipo GFP E RFP, e poi seguire con il microscopio confocale o a fluorescenza la localizzazione cellulare. Dopodiche' per dimostrare che quella e' la proteina che fa da trasportatore ed e' indispensabile, fai il knock out della prot. X...se davvero e' indispensabile seguendo la fluorescenza nn troverai + la prot. Y sull'endosoma. Pergiunta se la prot. Y e' indispensabile per l'endosoma con il knock out lo vedi.

Mi sa che con l'esperimento che dicevi te si vede solo che le 2 prot interagiscono...pero' a dire il vero il frazionamento di attivita' nn lo conosco...cosa e'?
ciao ciao

Biotecgen
Utente Junior

Citt�: Napoli

191 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2007 : 16:33:57

in questo caso X rappresenta il ligando e Y il recettore. Con il frazionamento di attivit� si parte da una miscela di proteine tra cui c'� X, ma noi non sappiamo qual �. quindi si prende un estratto della miscela e la si suddivide in frazioni e si va a vedere in quale di queste frazioni c'� la proteina che interagisce con il recettore Y sull'endosoma, dopo di che si prende questa frazione e la si sottopone ad un ulteriore frazionamento, rieseguendo lo stesso esperimento fino a quando non si ottiene la singola molecola X in grado di legarsi al recettore Y.
Spero di non averti creato confusione!

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.

Fil23
Utente Junior

Prov.: estero
Citt�: London

238 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2007 : 17:38:48

Ah...io l'avevo capita un po' diversamente!
Si la tua idea e' sicuramente buona e forse la migliore...altrimenti mi viene in mente il GST-pull down?
Se vuoi qualche informazione su questa tecnica ti consiglio:
http://www.protocol-online.org/prot/Molecular_Biology/Protein/Protein_Interactions/GST_Pull-Down_Assay/index.html

Biotecgen
Utente Junior

Citt�: Napoli

191 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2007 : 17:52:09

OK. Grazie mille per le informazioni.

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.

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