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Neurospora
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
 Inserito il - 20 ottobre 2012 : 13:12:24
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Ciao a tutti :)
sto studiando due tecniche: sequenziamento con bisolfito e PCR metilazione specifica (MSP).
Premesso che ho già guardato le discussioni sul forum e ho spulciato le varie pagine in inglese, vorrei verificare se effettivamente ho capito alcune cose.
I primi passaggi delle due tecniche sono gli stessi: dunque si trattano i campioni di DNA (sia quelli che riteniamo siano ipermetilati sulle sequenze di interesse, sia quelli che riteniamo non siano metilati) con bisolfito (che può convertire solo citosine non metilate in uracile, lasciando immutate le 5-metil-citosine).
Dopo si procede con amplificazione mediante PCR utilizzando primers disegnati apposta per le sequenze metilate e non metilate.
A questo punto, per quanto riguarda la tecnica di sequenziamento con bisolfito, si procede appunto con sequenziamento (Sanger o pirosequenziamento) determinando in questo modo la frazione di citosine e timine e di conseguenza il livello di metilazione.
Mentre per quanto riguarda la MSP, si procede con separazione su gel di agarosio, rivelazione mediante bromuro di etidio e analisi del peso molecolare delle bande per verificare la presenza di metilazione e il suo livello.
Secondo voi c'è qualcosa che non mi è chiaro? Vi ringrazio in anticipo per la vostra cortese attenzione. :)
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Neurospora
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2012 : 13:31:12
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| mi basterebbe un "si" o un "no".... :D |
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Neurospora
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2012 : 14:48:11
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| Gentilissimi. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2012 : 15:26:54
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| Scusa se non siamo sempre tutti qui sul forum pronti a rispondere a qualsiasi domanda entro un ora! |
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Neurospora
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2012 : 15:32:03
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| scusa tanto, ma vedo 200 visualizzazioni in meno di un'ora e mi sento snobbata.. non mi pare di aver fatto una domanda secca, ho argomentato ed esposto i miei dubbi, pensavo fosse questa la filosofia del forum.. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 21 ottobre 2012 : 08:31:36
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Questo è un forum non una chat, a volte bisogna attendere prima di ottenere una risposta.
Se ci sono state 200 visualizzazioni e nessuna risposta vuol dire che o nessuna delle 200 persone sapeva rispondere o nessuno aveva il tempo di rispondere perchè magari al sabato pomeriggio gli utenti di questo forum hanno altro da fare. Ricordo che nessuno è pagato per rispondere alle domande sul forum e invito a rileggere il regolamento del forum
Citazione:
5) Nessuno è MAI obbligato a rispondere a nessun messaggio. Se lo fa è per sua pura gioia e gaudio. Evitare quindi di mandare un messaggio ogni 10 minuti chiedendo di rispondere alla propria domanda.
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Ciò detto, a memoria mi sembra che quello che scrivi sia giusto, ma non ho mai usato questo tipo di tecniche. |
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