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laura85
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106 Messaggi

Inserito il - 27 gennaio 2007 : 20:50:26

Ciao ragazzi!
qualcuno di voi sa dirmi qualcosa su questa tecnica...ho cercato un p� in giro ma ho trovato ben poco...
vi dico su cosa si basa e vi pongo una domanda...
1.parto da dna genomico che contiene siti metilati e non
2. lo sottopongo a digestione con enzima di retsrione MSE I, che non taglia i siti metilati
3. ottengo diversi frammenti che contengo i siti metilati (ovviamente)
4. uso adattatoti e sottraggo il dna ripetitivo...ho solo dna ss
5. una parte di questi frammenti viene sottoposta a pcr con primer specifici per gli adattatori
6. la parte restante viene digerita con BSTU I , enzima che taglia le CpG non metilate e poi pcr con primer specifici per gli adattatori
7. array:
coloro di verde i prodotti della prima pcr (solo taglio con mseI)
rosso per l'altro prodotto (taglio con mse I e con Bstu I)
ibridizzo su un array che contiene probe che derivano da frammenti di dna genomico digeriti con BSTU I

spot verde: dna non metilato
spot rosso: dna metilato o senza CpG
per discriminare tra questi due devo cercare i siti di restrizione per BstuI

Bstu + � dna metilato
Bstu - � senza Cpg...
cos� dicono gli appunti ma a me sembra sbagliato....nel senso che il dna positivo per Bstu I non dovrebbe essere il dna non metilato?? visto che Bstu I taglia le seq CpG non metilate???
HELPPPPPPPPP RISPONDETEMI VI PREGO � urgente
grazie a tutti in anticipo
by laura depressa