Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Tecniche
 problemi di clonaggio
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

prandoFDA
Nuovo Arrivato


Prov.: Brescia
Città: Botticino


17 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 15:55:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di prandoFDA Invia a prandoFDA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
buongiorno ricercatori!

sto subclonando l'ORF di un gene di 1500bp in due plasmidi diversi (uno per espressione eucariotica, l'altro è un costrutto lentivirale)

ho disegnato una coppia di primer a monte e a valle del sito di inserzione per verificare se l'inserto c'è o meno

col primo plasmide tutto bene: lo screening delle colonie ha generato dei prodotti di pcr di 400 bp (quindi senza inserto) e 1900 bp (con inserto!)

per il secondo plasmide invece non trovo nessun prodotto di pcr!

vedo solo il mio controllo positivo di reazione (cioè il plasmide originale) che generea un prodotto piccolo (circa 300 bp)

domanda: come è possibile che siano cresciute le colonie batteriche (che hanno quindi in qualche modo acquisito la resistenza all'ampicillina) se non trovo nessun prodotto di pcr?

life happens

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1700 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 17:03:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Di solito possono avvenire 2 cose:
- una quota del plasmide non si è tagliato
- una quota del plasmide si è tagliato con un solo enzima e quindi si è richiuso con la ligasi

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
Torna all'inizio della Pagina

prandoFDA
Nuovo Arrivato


Prov.: Brescia
Città: Botticino


17 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 17:19:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di prandoFDA Invia a prandoFDA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
vero

ma in entrambi i casi dovrei vedere il prodotto di pcr, e invece non c'è nulla

life happens
Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina