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cla_mls
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4 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2012 : 11:09:03

Ciao ragazzi,

sto letteralmente impazzendo con la mia pcr. Vi spiego. Lavoro sulle falene, ho 3 combinazioni diverse di primers, per tre parti differenti del gene di mio interesse. Prima di passare ai campioni importanti ho ottimizzato la mia pcr utilizzando dei campioni prova (DNA estratto dal corpo delle larve di falena). Il problema � che quando passo poi ai campioni importanti (DNA estratto dalle ghiandole delle falene)una combinazione di primers non amplifica pi�!

Mi sapete dare qualche consiglio?

nickdumb
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7 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2012 : 23:51:40

non ho mai lavorato sulle falene, per� mi verrebbe da pensare che potrebbero esistere differenze tra la sequenza utilizzata nella prova e quella del DNA delle ghiandole.
Bisognerebbe capire qual � la sequenza bersaglio e se i primer sono adeguati ad essa.
Esistono altri lavori simili in letteratura, dai quali sia possibile estrapolarne i primers utilizzati?Oppure hai disegnato a mano le coppie di oligonucleotidi?

cla_mls
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 09 dicembre 2012 : 12:53:55

Li ho presi da un lavoro in letteratura.. Domani provo a cambiare il primer reverse. Ho visto che in un lavoro simile usano un altro reverse.. e incrociamo le dita!!

nickdumb
Nuovo Arrivato

7 Messaggi

Inserito il - 09 dicembre 2012 : 17:45:50

buona fortuna! :)