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Tazia
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Inserito il - 23 gennaio 2013 : 22:15:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Tazia Invia a Tazia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, studiando l'RT-PCR q. mi è sorto un dubbio: nei miei appunti ho scritto che per valutare l'efficienza si devono fare PCR con diluizioni scalari in modo da ottenere un fascio di curve. Da qui poi ricavare i CT e metterli in un grafico con CT sulle ordinate e Log n di cicli sulle ascisse. A questo punto con il metodo dei minimi quadrati calcolare la pendenza della retta che meglio approssima questi dati. La pendenza va inserita nella seguente formula:

100*[10^(-1/slope) -1]

Ad una pendenza di -3,32 corrisponde un'efficienza del 100%.
Questa formula però vale solo per efficienze molto alte e può essere utilizzata se un po' corretta per efficienze fino al 90%.

Se quanto detto fino qui è giusto, mi restano alcuni punti oscuri:

- Perché costruire una retta di taratura per verificare un'efficienza del 100%? Non basterebbe vedere se tra diluizioni che differiscono di un fattore 10 c'è una differenza di CT di 3,32? Il punto è che la pendenza della retta dà un'approssimazione dei dati?

- La formula non vale per efficienze più basse del 90 perché è "tarata" su una curva che segue 2^x?

- Se io ho una PCR qualsiasi e voglio sapere la sua efficienza come faccio a sapere se posso applicare la formula o no dato che non so se l'efficienza è maggiore del 90?

- Come si calcolano le efficienze minori?

Grazie in anticipo a tutti, intanto riprendo a spulciare il web e il forum

Tazia
Nuovo Arrivato



21 Messaggi

Inserito il - 23 gennaio 2013 : 23:00:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Tazia Invia a Tazia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusate, le ultime tre domande le ho risolte realizzando che quando il prof ha detto "la formula non funziona" intendeva dire che con efficienze inferiori non restituisce 100, non che non è applicabile!!!

Resta quindi solo la prima domanda :)
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