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Strelitzia
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 15 marzo 2013 : 16:06:51
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Ciao a tutti! Spero che qualcuno mi possa aiutare!! Recentemente nel mio laboratorio è stato comprato un apparecchio per la western blot: il Trans Blot Turbo della Biorad. Sinceramente stiamo avendo non pochi problemi ad utilizzarlo… l’efficienza di trasferimento risulta essere davvero bassa…qualcuno che l’ha già utilizzato ha qualche consiglio?? Ulteriori dettagli: usiamo per il trasferimento i Trans-Blot® Turbo™ Mini PVDF Transfer Packs ma come gel usiamo quelli fatti in casa, da 1.5mm, 12%acrilamide.
Grazie mille a tutti
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Ababy
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
 Inserito il - 16 marzo 2013 : 14:45:01
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Ciao!
Avete provato a trasferire ON a 4°C? Con gel da 1,5mm a quella percentuale hai bisogno di molto tempo.
Noi usiamo il miniprotean, sempre della biorad, e con gel da 1mm all'8% o 10%, 1h 1/2 è più che sufficiente. L'apparato però va lasciato sempre in ghiaccio, perchè se comincia a scaldare non gli fa molto bene.
Quando invece facevamo gel da 1.5mm, con lo stesso apparato, lasciavamo in camera fredda ON e si trasferiva abbastanza bene.
Avete provato a controllare sul datasheet dell'apparato se ci sono le condizioni ideali per il trasferimento?
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 16 marzo 2013 : 17:58:17
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@ababy: per quello che ho visto sul sito biorad è un apparecchio che fa il trasferimento in meno di 10min...
@Strelitzia: perchè dici che l'efficienza è bassa? Fai un rosso ponceau? Lo vedi dai marker? |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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Strelitzia
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 18 marzo 2013 : 10:15:36
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Grazie per le risposte.
@ababy: il metodo che hai suggerito è quello classico che avevamo sempre utilizzato prima di comprare questo strumento trans Blot turbo che dovrebbe blottare in 10 minuti con efficienza pari o superiore rispetto al metodo classico.
@domi84: Mi accorgo della bassa efficienza sia dal rosso Ponceau sia dal successivo sviluppo che richiede tempi biblici (e comunque alla fine non riesco ad ottenere un segnale accettabile) rispetto a quando uso il metodo classico con il MiniTransBlot-Cell. |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2013 : 13:58:53
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Ciao
uso anche io lo stesso strumento. Prova ad usare il protocollo "Biorad mini" (o midi)e modificalo (edit) a 30 minuti (invece di 10). A me funziona.
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Simone_Scientist
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2013 : 12:03:37
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Ciao, noi lo abbiamo provto più volte. Abbiamo ottimizzato il metodo di transfer e fx molto bene sempre. Partiamo però dal presupposto che noi che facciamo Proteomica lavoriamo solo con gel Precust dell'Invitrogen 4-12%.
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Problemi Trans Blot Turbo (Biorad)
Didattica e Relazioni
