Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
laurina
Nuovo Arrivato
61 Messaggi |
 Inserito il - 08 aprile 2013 : 18:06:27
|
Buonasera a tutti.
avrei un chiarimento da chiedervi..
spero nn siano stupidaggini quelle che sto per scrivere.
sto studiando le tecniche elettroforetiche su gel di poliacrilammide
(PAGE)....
e volevo sapere se è giusto che esistono diversi tipi di PAGE:
1) in condizioni native, senza SDS
2) in condizioni denaturanti, con SDS
3) in condizioni denaturanti e riducenti, con SDS e agenti riducenti ( ditiotreitolo); questa sarebbe l'elettroforesi discontinua.
non ho capito nulla oppure è giusto?!
grazie mille per il vostro aiuto. #55357;#56842;
|
|
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
 Inserito il - 08 aprile 2013 : 21:12:03
|
Concordavo con te sino alle ultime quattro parole del punto tre.
Un'elettroforesi discontinua non è un'elettroforesi condotta in particolare condizioni denaturanti, riducenti etc, quanto invece una migrazione fatta avvenire in un gel la cui composizione di Acrilamide-bisacrilamide varia in maniera non graduale lungo la lunghezza dello stesso. Caso classico, nonché il solo che mi sovviene, è quello che vede i cm superiori del gel ad una percentuale più bassa e la porzione restante ad una percentuale di A+B superiore, di modo da creare un'impaccamento delle proteine al confine tra la prima regione, detta stacking gel, e la seconda, running gel. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
 |
|
|
laurina
Nuovo Arrivato
61 Messaggi |
 Inserito il - 09 aprile 2013 : 09:43:02
|
 Scritto da MolecularLab Mobile
Perfetto!
Sei stato chiarissimo, grazie mille!
Un'ultima cosa.... quindi l'elettroforesi discontinua posso considerarla come un 4'tipo di PAGE? |
|
|
|
laurina
Nuovo Arrivato
61 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2013 : 10:30:32
|
Scritto da MolecularLab Mobile
Scusa, stavo leggendo sul mio libro la SDS-PAGE , che dice:
"I campioni che devono essere analizzati mediante sds-page vengono prima bolliti per 5 minuti nel tamponendel campione, sample buffer, contenente sds e 2-mercaptoetanolo. ........
....... I campioni che devono essere separati nn vengono introdotti direttamente nel gel di separazione. Infatti, dopo che il gel di separazione è stato versato tra le due lastrine di vetro, ed è avvenuta la sua polimerizzazione, gli viene versato sopra un gel di impaccamento, stacking gel) più corto dove si formano i pzzetti e vengono caricate le proteine.
Il gel di impaccamento ha la funziine di concentrare in campione di proteine in una sottile banda, prima che entri nel gel di separazione. ........"
Sarebbe questa l'elettroforesi discontinua?
Nn capisco se la disc-elettroforesi è una cosa a se stante o se invece è in generale un meccanisco, che poj ritrovo ad esempio nella nella SDS-PAGE.. :( |
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2013 : 11:34:03
|
Quella che ha descritto il tuo libro è l'elettroforesi discontinua, esattamente. Dal mio umile punto di vista la presenza o meno di denaturanti o riducenti riguarda le condizioni con cui si intende trattare i campioni, la discontinuità o meno interessa invece la natura del gel stesso.
Ma sono oscuro nella spiegazione, tentero' di esser più specifico.
Normalmente una elettroforesi discontinua viene utilizzata per impaccare a basso voltaggio le proteine in una sottile banda, di modo che una volta incrementati i Volt gli analiti partano da pressapoco la stessa posizione. Cio' è di vitale importanza per ottenere dati affidabili circa la loro mobilità elettroforetica e quindi il loro peso molecolare apparente. Sarei quindi incline ad associare percio' l'uso di un gel discontinuo ad un'elettroforesi che intenda valutare il peso molecolare delle proteine (come la SDS-PAGE).
Ma, tuttavia, non confondere le condizioni in cui l'elettroforesi è corsa con la natura del gel stesso, che, ti ricordo, puo' essere, visto che non l'hai citato, anche a gradiente. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
|
laurina
Nuovo Arrivato
61 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2013 : 12:10:57
|
Ok, grazie mille...
Penso d'aver capito.. nel caso ti ricontatterò 
Buona giornata
Laura  |
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2013 : 14:33:42
|
| Buona giornata a te, per ogni dubbio scrivi sul forum e qualche anima pia risponderà |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
chiarimento
Siti Scientifici
