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PleckstrinHomologyDomain
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7 Messaggi |
 Inserito il - 03 maggio 2013 : 22:58:41
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Sono alle prese con una presentazione su vita morte e miracoli dell'insulina.. sono arrivato alla prima produzione della genentech di questo paper
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC382885/pdf/pnas00001-0114.pdf
dopo essermelo letto circa 20volte mi sento ancor più scemo di prima... le mie domande sono:
1)perchè devono attaccare al C terminale della beta galattosidasi le catena Alfa o Beta ?? non bastava metterle a valle di un promotore a caso?
2)attaccano i frammenti alfa o beta al C terminale della beta gal con una METIONINA di mezzo.. e poi con del Bromo CIanuro magicamente staccano i peptidi di insulina?? com'è possibile? come funziona??
3)ottenute le singole catene alfa e beta le uniscono con un eccesso di alfa e mantenendo un ambiente riducente giusto?
4)leggevo altri lavori più recenti dove ora si preferisce codificare direttamente per la PROinsulina cioè B-C-A (peptide Beta peptide C e peptide Alfa).. ma l'ossidazione dei ponti cistinici avviene nello spazio intermembrana di e. coli? (unico ambiente riducente direi) o si fa foldare in vitro a parte, utilizzando riducenti?(sempre se possibile) e dunque si stacca il peptide C sempre in vitro con analoghi di PC1/3 -PC2 e cpE?
5)per produrre in lievito invece si produce tutta la PREPROinsulina dove però il peptide N terminale di signalling è scelto apposta per l'escrezione.. giusto? gli enzimi per tagliare via correttamente il peptide C sono già presenti endogeni in lievito?
Help...T.T
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