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 Western Blotting di gel colorati con coomassie colloidale
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AntonioSillo
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61 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 15:35:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AntonioSillo Invia a AntonioSillo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Ragazzi;
qualcuno di voi ha mai fatto il trasferimento di un gel di PA colorato con coomassie o coomassie colloidale? interferisce in qualche modo con l'ibridazione con anticorpi o con l'ECL?
sapete se bisogna cmq fissare al gel le proteine prima di colorare?
Grazie mille,
Sillo

GFPina
Moderatore

GFPina

Cittā: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 18:27:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se fai una colorazione acquosa (non fissi le proteine!) puoi blottare il gel, altrimenti NO!
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AntonioSillo
Nuovo Arrivato



61 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 21:13:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AntonioSillo Invia a AntonioSillo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie per la risposta... ma non mi č molto chiara una cosa...
come posso colorare il gel se prima non fisso le proteine? se non le fisso, quando metto a bagno il gel nel coomassie se ne escono dalle maglie, e come se non bastasse la policrilammide ha un'indice di swelling abbastanza alto in acqua, quindi a maggior ragione le proteine se ne scappano.
ma tu l'hai mai fatto?
interferisce in qualche modo il coomassie con il trasferimento e l'ibridazione con anticorpi?
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