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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Cittā: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 13 maggio 2013 : 15:42:53
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Ciao a tutti,vi č mai capitato di avere del DNA estratto con una metodica che ad un certo punto scompare?
Parto dall'inizio.
Normale routine: campioni di sangue intero con sodio citrato o edta, estrazione di DNA con una metodica ( chiamiamola A) su cui vengono effettuati dei dosaggi con il TAQMAN con discriminazione allelica. Ad un certo momento č stata cambiata la metodica di estrazione ( chiamiamola B) e per un puro caso ci siamo accorti che i campioni, nel tempo, nell'arco di uno o due mesi si degradavano, o meglio le curve di amplificazione scomparivano e quindi abbiamo dedotto che si degradava in qualche modo il DNA.
Abbiamo cercato di dargli una spiegazione verificando le seguenti possibili cause: anticoagulante, tipologia di plastiche diverse, sterilizzazione delle vials, Taqman, tipologia di dosaggio. Il tutto facendo le opportune prove, ma non siamo ancora approdati ad una risposta.
I campioni vengono conservati a -20°C per entrambi i metodi estrattivi.
Chiaramente il metodo estrattivo B determina un qualcosa di diverso rispetto al metodo A, entrambi in commercio ed entrambi di ditte validissime,ma non riusciamo a capire cosa.
A qualcuno di voi č capitato qualcosa di simile?
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GFPina
Moderatore
Cittā: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2013 : 18:31:59
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scompare il DNA...
... e ricompare cin!
Ciao cin come stai? Che piacere ritrovarti sul forum! 
Avete anche controllato l'acqua? Non č possibile che abbiate una contaminazione da DNasi?
Vi č successo con diversi kit della ditta B (diversi lotti) o ne č stato usato solo uno finora?
Non so se serva, ma magari avere i dettagli dei due metodi di estrazione (se non vuoi fare i nomi delle ditte) potrebbe aiutare. |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Cittā: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 29 maggio 2013 : 14:41:35
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| Grazie Gfpina, ti ho mandato un messaggio. |
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Dna che scompare...
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