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lajenteloca
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 21 maggio 2013 : 10:58:56
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Ciao a tutti, ringrazio in anticipo chi mi rispodera'... sono 2 mesi che provo a far funzionare un western per due proteine, ma come vedete nell'immagine ho ottenuto solo una serie di bande aspecifiche... Ho provato a bloccare il primario e il secondario sia con BSA 2.5 %, o entrambi con latte 5%, ma il risultato e' sempre lo stesso...:/ Vorrei provare a usare BSA per il primario e latte per il secondario, e lavaggi ad alta velocita' tra i due... Potrei anche provare ad aumentare la concentrazione del latte o lasciarlo on, non lo so..:/ Mi suggerite qualcosa??? Graaazieee
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2013 : 11:28:11
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Western blot su che campioni?
Estratti cellulari "grezzi" oppure cosa?
Utilizzi un primario contro la proteina o contro un tag?
Hai provato ad aumentare la diluizione di primario e/o secondario?
La lastra non è impressa totalmente, evento che mi aspetterei qualora il problema sussistesse nel blocking della membrana. Probabilmente è legato alla specificità dei tuoi anticorpi.
Raccontaci di più.
Saluti |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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_ARY_
Nuovo Arrivato
Prov.: mi
Città: milano
81 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2013 : 20:43:31
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idrati bene la nitrocellulosa prima di assemblare il tutto?
prova a non saturare e vedi se cambia qualcosa così capiamo chi è il problema. io non credo che il problema sia cosa carichi, perchè hai dei segni che non sono bande!
in bocca al lupo |
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Western: problemi con blocking, bande aspecifiche, ecc
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