Promotori - come ottenerli?

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Chimere, cloni e geni
Nicole Le Douarin

Metodologia biochimica.Le bioscienze ele biotecnologie in laboratorio. Nuova edizione
John Walker, Keith Wilson

Per una storia del Consiglio Nazionale delle Ricerche
Autori Vari

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

Laboratorio

Biologia Molecolare

Promotori - come ottenerli?

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Lord Garland
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2013 : 22:45:39

Ciao a tutti. Io ho un serio problema:

mi serve come avere un certo promotore genomico. Se estraggo DNA da una cellula, come procedo per isolarmi quel preciso promotore?

Provo a buttare l� un'ipotesi; ditemi se siete d'accordo o no o se conoscete altre possibilit�: sono tutt'orecchi:

ho una cellula --> estraggo genomico --> Uso enzimi di restrizione per spezzettarmi il DNA (qui non so molto - chi mi illustra questo punto?) --> user� enzimi di restrizione che non tagliano il mio promotore --> faccio una PCR con il primer Forward e Reverse del mio promotore --> Lo isolo e lo uso per lo studio. E' giusto?

SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 23 maggio 2013 : 18:43:14

Se conosci la sequenza non ti serve digerire il genomico. Basta estrarlo e con i primers che ti sei disegnato (sempre ovviamente che tu conosca la sequenza) ti fai una bella PCR per amplificarlo. Io ho fatto cos� per un promotore di Xenopus laevis.

zerhos
Utente Junior

Prov.: Pisa
Citt�: Pisa

421 Messaggi

Inserito il - 24 maggio 2013 : 21:54:07

Tecnicamente � sufficiente una PCR come dice il saggio SpemannOrganizer, tuttavia il grosso del problema dei promotori � capire dove esattamente inizino!!!!!.
Per convenzione quando si amplifica un promotore nuovo, si amplificano "n-kilobasi" subito a monte dell'atg (codone di inizio della traduzione). A monte dell'atg troverai sicuramente la 5'utr del gene (se esiste) e quindi la sequenza del promotore propriamente detto, e se sei sfortunato diversi introni(anche mooolto grossi) tra l'atg e il tuo promotore agognato. Il punto di problema � che le sequenze regolatorie del tuo promotore possono essere sparse anche a valle di esso, quindi nella 5'utr del gene, negli introni (capita molto spesso) e addirittura all'interno della sequenza tradotta (0_0).
Tutto questo per dire che isolare un promotore non � cosa affatto banale!

"l'unica differenza tra me e un pazzo � che io non sono pazzo!"
Salvador.Dal�

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2013 : 00:39:53

Dai un occhio qui se � stato gi� caratterizzato il promotore del tuo gene:
http://rulai.cshl.edu/cgi-bin/TRED/tred.cgi?process=home

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...