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Discussione

flebo
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11 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2013 : 15:37:19

esperimento con 2 costrutti
uno di controllo che � formato dal promotore per l'insulina(quindi solo nelle cellule beta differenza)da cre ricombinasi e dal dominino del recettore per gli estrogeni (tamoxifene).la cre riconosce un sito lox p presente nel secondo costrutto. in assenza di tamoxifene la cre q resta nel citoplasma.
secondo costrutto sempre attivo � fatto da CMV/beta actina ubiquitario e esprime 2 prot di marcatura lacz(da colorazione blue e HPAP(fosfatasi umana colorazione bianca).
le cellule sono tutte blu per colpa di lacz.

se do tamoxifene per un certo periodo, cre va nel nucleo taglia lacz e le cellule esprimono HPAP diventando bianche. chi si � marcato resta marcato(bianco) chi non si � marcato non � piu marcabile (resta blu).
leggendo sugli appunti pero' trovo "in conseguenza all'assenza sucessiva di tamoxifene se una di queste cellule beta marcate proliferir� la cellula figlia non sar� marcata e sar� pertanto riconoscibile essendo blu.questa tecnica di chiama LINEAGE TRACING o pulse"
ma come fa la cellula figlia a tornare blu?

zerhos
Utente Junior

Prov.: Pisa
Citt�: Pisa

421 Messaggi

Inserito il - 23 giugno 2013 : 13:43:07

Pensaci bene e troverai la risposta.
In questo esperimento la ricombinazione avviene solo nelle cellule differenziate che esprimono insulina, questo comporta che tutte le cellule insulina positive diventano bianche in presenza di 4OH-T (ammessa un'efficenza del 100%), quindi si smette di somministrare 4OH-T. Se c � attivit� staminale, queste nel tempo produrranno nuove cellule insulina positive, che non hanno subito ricombinazione e quindi vedrai ricomparire cellule blu in mezzo a cellule bianche.[/u]

"l'unica differenza tra me e un pazzo � che io non sono pazzo!"
Salvador.Dal�

flebo
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2013 : 13:50:21

zerhos grazie! avevo la soluzione sotto al naso e non la vedevo! ancora grazie!