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 Espressione ormone della crescita in PET-22b
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Giulisoft
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Inserito il - 09 luglio 2013 : 11:32:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giulisoft Invia a Giulisoft un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, premetto sono nuova del forum, ho fatto una ricerchina rapida ma mi pare di non aver trovato la risposta alla mia domanda. Stiamo preparando per un esame di biologia applicata una strategia di clonaggio di un gene, io ho scelto GH e come vettore di clonaggio il plasmide della Novagen pEt-22b. Ora, correggetemi se sbaglio, io cerco la mia sequenza su NCBI e individuo la sequenza del mio peptide maturo, perchŔ nella sequenza CDS c'Ŕ anche la sequenza segnale che in E.Coli che ospita quel plasmide non mi serve, perchŔ voglio fondere il mio gene con la sequenza leader Pelb che mi porterÓ la proteina nel periplasma dove riceverÓ alcune modifiche post traduzionali. Il problema Ŕ che con qualsiasi enzima di restrizione definito dal mio plasmide io utilizzi non viene assolutamente mantenuta l'ORF! Alcuni compagni hanno risolto inserendo un "GC" in modo da ottenere un codone codificante per la glicina (nella figura allegata, ha inserito gli ultimi due GC in grassetto in modo da ottenere la sequenza della glicina cerchiata in rosso) che Ŕ piccola e non da fastidio, ma a me sembra una cazzata aggiungere aa a caso per mantenere l'ORF, non so...consigli? Qualcuno esperto in materia? Premetto che la preparazione di biologia molecolare che abbiamo si riduce ad un esamino dato in triennale, e noi siamo in magistrale -.- Scusate per la lungaggine del messaggio, grazie!

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