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AndreaDC
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2013 : 15:30:39

ho amplificato una regione che contiene la orf per i geni gag di HIV-1. mi sono ottenuto quindi la regione che contiene estremità blunt, come faccio ad avere estremità cos diverse per un clonaggio direzionale?devo usare un'altra PCR con primer con una ancora?potete consigliarmi cosa fare nel momento in cui ciò sia stato realizzato un plasmide d'espressione?(voglio ottenere le proteine)

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 12 luglio 2013 : 12:33:57

Devi fare una PCR con dei primers che contengano le sequenze per l'enzima di restrizione che ti serve, tagliare l'amplificato con l'enzima e poi procedere al clonaggio.
(ovviamente l'enzima non deve tagliare all'interno della tua sequenza!)

AndreaDC
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 12 luglio 2013 : 12:37:36

grazie mille :)