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doc.matt
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 24 marzo 2014 : 22:37:20

Ciao a tutti,

Sono a sperimentare un blocco con anticorpi di una proteina di mio interesse, per poi FACSare il risultato e capire l'attivazione della Nfkb pathway su un modello di cellule U937 GFP.

Ma la mia domanda è assai piu semplice.

Ho la mia molecola che è concentrata a 100microg/ml e ne spipetto semplicemente 4 ul direttamente nei miei wells (perche voglio avere 1ug/ml in un volume di 400ul) dove ho deciso che la condizione deve essere solo proteina di interesse.

Per il blocco con anticorpi devo invece mixare la mia proteina di interesse A PARTE, a metà con anticorpi concentrati 1mg/ml.

La soluzione che ne viene fuori va a finire nei miei wells, ma in che misura ? qual'è la concentrazione della mia soluzione finale mixata? dovrò sempre mettere 4ul come se la mia proteina (perchè sempre 1ug/ml è la concentrazione che voglio) nn fosse bloccata con mAbs? o questo non è comparabile con l'altra condizione?

scusate per la leggera confusione saluti

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 25 marzo 2014 : 08:25:46

Quando hai una soluzione mista devi considerare le singole componenti.

Ad esempio se vuoi fare una soluzione 1mg/ml di A + 3mg/ml di B metterai 1 mg di A e 3 di B in 1 ml di soluzione finale.

Ora, quando aggiungi gli anticorpi alla tua proteina la diluisci 2 volte (perchè, se ho capito bene, mescoli 1 volume di anticorpi con 1 volume di proteina). Dovrai quindi mettere il doppio del volume in ogni pozzetto in quanto la tua soluzione sarà diventata 50ug/ml per la proteina.

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