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Maria Summers
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 Inserito il - 16 maggio 2014 : 14:16:19
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Buongiorno a tutti,
è la prima volta che scrivo.
Mi trovo ad aver fatto una lisi batterica per fare poi un'estrazione di proteine.
Avevo un pellet di 0.7g; ho aggiunto un buffer di lisi di 20 mL composto da:
- Tris acetato 50 mM pH 7.6
- MgSO4 2 mM
- CaCl2 2 mM
- DTT 1 mM
- PMSF 0.5 mM
Poi ho aggiunto lisozima, 0.2 mg/mL.
Ho aspettato 30' in ghiaccio e 30' a t.a. e mi aspettavo un aspetto mucoso. Invece l'ho trovato così come l'avevo lasciato.
Ho ripreparato il lisozima e ho aspettato di nuovo i tempi dovuti.
Questa volta il preparato era diventato un fluido leggermente viscoso, con pochi frammenti bianchi in sospensione.
Ho aggiunto MgCl2 10 mM e NaCl 50 mM, poi la DNAsi 10ug/mL.
Dopo una delle due ore di attesa mi sono accorta che si era formato un precipitato, quasi come se la metà dei batteri presenti non si fosse lisata.
Qualcuno può aiutarmi a capire cosa potrebbe essere successo?
Sto per impazzire.
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Lisi batterica
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