Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 consigli tecnici sul sistema gateway
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Tag   gateway    clonaggio  Aggiungi Tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

trudi87
Nuovo Arrivato

Città: Napoli


6 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2014 : 13:16:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di trudi87 Invia a trudi87 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
il mio scopo è quello di esprimere delle proteine ricombinanti in batteri. Ho scelto "champion pET160/pET161 gateway expression with lumio technology, Invitrogen" e il mio primo dubbio era sul tag, secondo voi è meglio all'N-(pET160)o al C-terminale(pET161)?. Il mio secondo dubbio è sull'entry clone da usare. Sono indecisa tra pENTR/D-TOPO Cloning Kit e pENTR/SD/D-TOPO Cloning Kit, il primo è generico, il secondo pare che ottimizzi l'espressione in batteri, ma non ho capito come sia possibile, dato che l'espressione in batteri avverrà attraverso il vettore di espressione!
Grazie mille a tutti

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2014 : 19:52:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh la scelta se posizionare il tag all'N o al C-terminale è abbastanza soggettiva e dipende anche dall'uso che ne vuoi fare. Inoltre dipende anche dalla proteina, un tag può a volte dare fastidio al corretto folding e dipende dalla tua proteina se le possa dare meno fastidio da una parte o dall'altra. Non conosco nello specifico quei vettori di espressione (anche perchè a quanto vedo sono nuovi) però da una ricerca velocissima (e non molto accurata) mi sembra di capire che quello all'N-terminale sia tagliabile, quindi se vuoi poi eliminarlo ti conviene scegliere quello.
Controlla bene però, perchè come dicevo io ho fatto una ricerca velocissima.

Per quanto riguarda l'entry Vector l'SD ti aggiunge la sequenza Shine Dalgarno che è riconosciuta dai ribosomi batterici e aumenta l'espressione della tua proteina, la sequenza poi passa assieme a quella del tuo gene dall'entry vector al vettore di espressione, quindi ce l'avrai anche lì!
Torna all'inizio della Pagina

trudi87
Nuovo Arrivato

Città: Napoli


6 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2014 : 15:39:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di trudi87 Invia a trudi87 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie GFPina, grazie per la risposta! purtroppo non ho informazioni sul folding delle future proteine ricombinanti poichè non sono mai state prodotte, quindi mi sa che proverò alla cieca!
Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina