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 Kit StarGate® for fast protein expression cloning
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adamonobile
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2014 : 14:59:20  Mostra Profilo Invia a adamonobile un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti,
sto utilizzando per la prima volta un kit di vettori plasmidici di clonaggio ed espressione StarGate® acquistato presso IBA. Probabilmente il mio problema risulterà banale :)
Andando a leggere il manuale vi sono 2 capitoli che riguardano ogni reazione, uno che tratta i vari reagenti e come conservarli e uno sul protocollo vero e proprio di utilizzo.
Il mio problema riguarda due componenti che sono:
1) 400 bp PCR-fragment (2 nM)
2) Donor Vector with 400 bp DNA insert (2 ng/#956;l)

Questi due vanno sotto il nome di "Control reaction" ma non riesco a capire come utilizzarli e a cosa possano servire dato che non c'è un capitolo che li tratti dal punto di vista dei protocolli. Qualcuno può aiutarmi?

Grazie a tutti anticipatamente!

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2014 : 16:25:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il primo è un amplificato, lo utilizzi come fai per la sequenza che hai amplificato tu, quindi in parallelo avrai:
- la tua sequenza amplificata da inserire nel vettore
- l'amplificato fornito da inserire nel vettore

Il secondo è il plasmide che contiene già l'inserto dell'amplificato, quindi lo userai nella fase successiva assieme al plasmide in cui hai inserito il tuo inserto e quello in cui hai inserito l'amplificato di controllo (vedi step precedente)
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adamonobile
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 08 settembre 2014 : 17:35:20  Mostra Profilo Invia a adamonobile un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille per l'aiuto e la velocità di risposta! Un ultima domanda :)
Io avrei controllato il mio destination vector tramite digestione con gli enzimi di restrizione e in seguito elettroforesi.
Questo controllo all'atto pratico a cosa mi servirebbe?
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