lettura allo spettrofotometro di RNA o acqua

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fantassmina
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 23 ottobre 2014 : 22:06:25

Ciao ragazzi, oggi mi � venuto un dubbio atroce.

Stavo leggendo un campione di RNA appena estratto con uno spettrofotometro (Perkin Elmer) che ha due alloggiamenti, uno per la cuvetta con il bianco (acqua milliQ) e uno per la cuvetta con il campione di RNA. Ho tarato lo strumento leggendo il bianco e poi ho letto il campione ed ho ottenuto una concentrazione di circa 2 ug/ul e fin qui tutto ok.
Siccome inizialmente avevo dei dubbi sulla presenza del pellet di RNA e avendo visto che ho ottenuto una concentrazione comunque alta (2ug/ul) ho pensato di leggere l'acqua milliQ per vedere che valori di assorbanza mi restituiva e mi ha dato dei valori assorbanza a 260 e 280
simili al mio campione di RNA...mi ha dato persino dei valori di concentrazione simili

...ma poi...concentrazioni di che nell'acqua??? e allora ho letto anche 1 ml di acqua RNasi-free comprata (Invitrogen)....e anche questa volta ho ottenuto dei valori di assorbanza e concentrazione simili a quelli del mio campione di RNA (e di altri campioni di RNA che avevo estratto precedentemente e per i quali sono sicura che il pellet c'era!!!

Quindi mi chiedo: se leggendo acqua milliQ e acqua RNasi free ottengo dei valori simili ai miei campioni di RNA, chi mi dice che nei miei campioni sto leggendo davvero RNA???? C'� qualcosa che non mi torna...potete aiutarmi???

Grazie!!

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 27 ottobre 2014 : 19:41:03

Ciao fantassmina!
Decisamente c'� qualcosa che non torna!!!

Citazione:

cuvetta con il bianco (acqua milliQ)
[...]
Ho tarato lo strumento leggendo il bianco
[...]
ho pensato di leggere l'acqua milliQ per vedere che valori di assorbanza mi restituiva e mi ha dato dei valori assorbanza a 260 e 280 simili al mio campione di RNA

(Se ho capito bene) il tuo bianco � l'acqua milliQ, quindi azzeri con acqua milliQ, poi leggi l'acqua milliQ e questa ti d� un valore di assorbanza diverso da 0 !?!? Questo non pu� essere...Usi sempre la stessa acqua?
Invece di dirci la concentrazione in ug/ul puoi scrivere queste assorbanze??
Le soluzioni che usi sono fredde? Se s�, a volte capita che la cuvetta di quarzo si appanni e la luce non passa, assicurati di asciugarle con la carta prima di leggerle...

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...