clonaggio in vettori retrovirali

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Cantico di una vita
Rita Levi Montalcini

Peptidi e proteine
Francesco Chillemi

Embriologia umana
William J. Larsen

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

clonaggio in vettori retrovirali

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

ori2c
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2014 : 16:38:15

Ho molte difficolt� nel clonaggio in un vettore retrovirale. I plasmidi che ottengo sono tutti riarrangiati e non contengono l'inserto. Qualcuno mi sa dire se devo seguire un particolare protocollo per il clonaggio in questi vettori oppure darmi dei consigli per impedire il riarrangiamento del plasmide?

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2014 : 18:15:59

Scritto da MolecularLab Mobile

Ho avuto il tuo stesso problema. Si trattava di un vettore lentivirale e quello che succede solitamente � che una volta trasformati i prodotti di ligazione nel batterio avvengono varie ricombinazioni a livello delle regioni LTR...
Comunque sono riuscito ad ottenere almeno un clone positivo per il costrutto che desideravo, tuttavia per paura che durante le successive fasi di crescita potessero avvenire di nuovo eventi di ricombinazione mi sono procurato uno speciale ceppo di coli, si chiama Stbl3. Il ceppo � appositamente disegnato per abbattere questi eventi di ricombinazione indesiderati e devo dire che ha funzionato bene (anche se nel mio caso fossi riuscito ad ottenere comunque il mio DNA ricombinante). Ti consiglio di adottare questo ceppo per ritentare una ligazione.