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Penelope12
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3 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2014 : 13:33:58  Mostra Profilo Invia a Penelope12 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve. ho un problema con il western. provo a spiegarvi. sto lavorando con campioni di sarcoidi e sto analizzando l'espressione del collagene I e III. ho letto che si devono usare condizioni non riducenti e perciò nei campioni non aggiungo il B mercapto. ho usato 40 ug ho preparato i campioni bolliti spinnati e caricati su un gel al 7.5%. la corsa sembra non dare problemi... faccio il traferimento vedo al ponceau e noto solo alcuni smear mentre la maggior parte delle proteine si trova in alto...(in realtà le uniche proteine che migrano correttam mi hanno detto che sono del serio tipo la banda visibile al ponceau all altezza di 55 kDa) aggiungo l'anticorpo e mi ritrovo effettivam tutte le proteine nella prima fase del running. qualcuno ha mai avuto qst problema? potrebbe aiutarmi? o magari qlk ha usato un particolare procedimento per visualizzare il collagene? ho pensato potesse essere il gel, cosi ho usato il pre cast e uno fatto con soluzioni di un altro lab, ho cambioato il laemmli ma in ogni caso il risultato è lo stesso! vi allego le immagini del ponceau e dello sviluppo! spero che qlk possa aiutarmi
grazie


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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 16 dicembre 2014 : 20:36:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
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