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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2007 : 18:44:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
SECONDO voi dopo defosforilazione di un vettore per l'uso successivo della ligasi come è necessario precipitare il DNA?
Qualcuno di voi ha già provato ad usare della ligasi scaduta? per voi funziona ugualmente?
Grazie

fatalerror
Nuovo Arrivato


Città: bruxelles


20 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2007 : 19:27:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fatalerror Invia a fatalerror un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
perchè devi precipitare il dna? non puoi trasformarlo in batteri, poi fare una coltura e 1 estrazione plasmidica????
non ho mai utilizzato una ligasi scaduta...non so risponderti
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fatalerror
Nuovo Arrivato


Città: bruxelles


20 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2007 : 19:40:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fatalerror Invia a fatalerror un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ops, rileggendo la domanda mi sono accorta che non l'avevo capita :-P
Credo che tu debba passare il tuo DNA su una colonna di purificazione (mi sembra che roche le fa). è semplicissimo e prende pochissimo tempo.
Per quanto riguarda la ligasi, visto che è scaduta e che quindi dovresti ricomprarla, ti consiglio Fermentas, 2 ore a T ambiente e il lavoro è fatto!
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi

Inserito il - 11 marzo 2007 : 21:19:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io di solito faccio la purificazione del vettore con il kit Quiagen..ma mi hanno detto ke si può anke bypassare come step, in modo da nn perdere materiale.

X la ligasi scaduta nn saprei..ma siccome il clonaggio è un esperimento ke riesce "quando Dio vuole" io nn introdurrei anke la variabile "scadenza" nel protocollo...cmq puoi sempre provare..magari riesce e ci levi il dubbio pure a noi!

Farah
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Anyra
Utente Junior

Anyra

Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara


212 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2007 : 10:59:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Anyra Invia a Anyra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ligasi scaduta funziona ugualmente, l'importante è che non sia rimasta fuori dal frigo e purchè non sia scaduta da oltre 10 anni.

Le colonnine Qiagen sono strepitose, quelle per la purificazione di reazioni o PCR.

Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw
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Cangrande
Utente Junior

Cangrande Della Scala

Prov.: Verona


280 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2007 : 13:58:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cangrande Invia a Cangrande un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sulla scadenza non ci sono problemi . . .
e' un obbligo commerciale

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.
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