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Kelloggs93
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 04 febbraio 2015 : 18:43:56
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Ciao!
Sto studiando per l'esame di biochimica applicata, e non riesco a capire il Metodo Quick Change nella mutagenesi. Più che altro, non riesco a capire il meccanismo.
So che è una mutagenesi sito-specifica, ma non capisco, ad esempio, come mai al momento della replicazione, si replica anche una molecola di Dna parenterale (quella che poi viene digerita con Dpn1).
Qualcuno saprebbe spiegarmi questa tecnica?
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2015 : 20:35:57
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Benvenuto/a Kelloggs93,
Citazione:
come mai al momento della replicazione, si replica anche una molecola di Dna parenterale (quella che poi viene digerita con Dpn1).
non ho capito bene cosa vuoi dire...
Il primer con la mutazione dà il via alla sintesi di un nuovo filamento di DNA. Quindi nell'eppendorf avrai una mix del vecchio plasmide (prodotto in batteri, metilato e senza mutazione) e del nuovo plasmide (prodotto in eppendorf, non metilato e con la mutazione).
Alla mix aggiungi DpnI https://www.neb.com/products/R0176-DpnI che è un enzima che taglia i plasmidi metilati e ti restano solo quelli non metilati (con la mutazione). |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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Kelloggs93
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2015 : 20:49:06
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Bene, devo aver interpretato male un'immagine che avevo visto.
Un'altra cosa, perchè il DNA batterico è metilato mentre quello mutato no?
Scusa per le domande banali e forse senza senso, ma questa tecnica non l'ho proprio capita evidentemente. |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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Kelloggs93
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2015 : 21:27:23
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Certo! Ora è tutto più chiaro, non avevo pensato che nella reazione in provetta non avviene metilazione.
Grazie mille! :) |
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