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 Approccio per ottenere un animale loxato?
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SpaziO InfinitO
Nuovo Arrivato

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Città: Torino


49 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 15:26:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpaziO InfinitO Invia a SpaziO InfinitO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti! Per ottenere un animale CRE-lox, bisogna ottenere prima un animale "loxato" ed un animale "cre", che successivamente vengono
fatti incrociare. Per ottenere un animale cre basta costruire un costrutto con promotore tessuto-specifico che si inserisce a caso nel genoma (quindi non mi preoccupo di dove si vada a mettere, tanto c'è il promotore specifico), mentre per creare un animale loxato, deve avvenire una ricombinazione omologa (visto che voglio eliminare l'esone fiancheggiato dai siti lox), ma cosa devo fare?
Devo fare un knock-out, un knock-in, un transgene? Mi spiegate per favore?

GRazie!!

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 19:52:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Che io sappia (ma non l'ho mai fatto in pratica) si fa un knock-in dello stesso gene fiancheggiato da loxP.

PS: si dice "floxato" (almeno, in inglese si dice "floxed").

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SpaziO InfinitO
Nuovo Arrivato

Prov.: TO
Città: Torino


49 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 21:30:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpaziO InfinitO Invia a SpaziO InfinitO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quindi si fa un knock-in + un transgenico per poi ottenere un knock-out dopo incroci specifici. Giusto?

Grazie!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 23:12:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
esatto. L'animale Cre volendo può essere sia un transgenico che un knock-in in realtà.

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zerhos
Utente Junior

ZERHOS

Prov.: Pisa
Città: Pisa


421 Messaggi

Inserito il - 21 febbraio 2015 : 01:33:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zerhos  Invia a zerhos un messaggio ICQ Invia a zerhos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per definizione un animale transgenico per la CRE è un knock-in, tutto ciò che si aggiunge ad un genoma deve essere considerato knock-in.
La differenza sta nella tecnica di inserzione che può avvenire tramite random insertion o per gene targeting(che sfrutta quindi l' evento di ricombinazione omologa sito specifica)

"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 22 febbraio 2015 : 02:22:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Gli animali generati con random insertion non vengono chiamati knock-in, ma transgenici.

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