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Autore

Discussione

Arianna P
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 29 ottobre 2015 : 17:25:07

Scritto da MolecularLab Mobile

Ciao,
il mio problema e' relativo a p-src (cell signaling) che non riesco piu a vedere in campioni precedentemente positivi e nemmeno in campioni nuovi che dovrebbero essere positivi.
Guardando il ponceau il transfer sembra ok.
Uso reagenti biorad.
Blocking con milk5%pbstween 0.1%
e anticorpi in milk 5% pbstween 0.1%. Ho provato anche delle varianti: nuova provetta di anticorpo, blocking bsa, tbs (anche se il ph era 8.5 della 10x), anticorpi in bsa...e...
Avete qualche consiglio?

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 29 ottobre 2015 : 20:07:26

Scritto da MolecularLab Mobile

Se vuoi vedere una phosphoproteina non � che il problema � negli inibitori delle fosfatasi che si sono degradati negli estratti?

Arianna P
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 29 ottobre 2015 : 22:14:27

Scritto da MolecularLab Mobile

Riesco a vedere p-her2 e anche p-akt. phospho mapk esce anche se a volte il segnale e' debole.
Dimenticavo, di solito carico 20 ug. Il trasferimento lo faccio a 300mA per 80 min