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Laui.88
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 Inserito il - 02 dicembre 2015 : 10:14:58
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Ciao!! Ragazzi, sto cercando di amplificare DNA convertito con bisolfito per fare un test di Methylation Sensitivie HRM. La reazione di PCR la faccio quindi in real-time per poter valutare le curve di melting e la differenza in Tm degli amplificati in campioni diversi. Ho disegnato primers appositi per amplificare DNA convertito. Al termine della reazione, ho un prodotto, identificato da un picco nel grafico delle curve di melting, che mi esce però dopo 40 cicli. In MS-HRM nei protocolli consigliano di fare 45 cicli (più del normale), quindi potrebbe essere che il mio prodotto esca così tardi secondo voi? Come faccio a essere sicura che quel picco corrisponda all'amplificato di mio interesse e non sia un aspecifico (o primer dimer)? Ora sto caricando su gel per vedere se la lunghezza del frammento corrisponde, ma ci sono altre deduzioni che potrei fare per esserne certa?
Grazie mille
Laura
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Melting product - MS-HRM
Didattica
