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Marba
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2 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2016 : 18:22:44

Ciao ragazzi,

Devo trasfettare pezzi di tessuto ( sono piccolissimi 1mm3 X 1mm3) in vitro utilizzando un vettore lentivirale-GFP.

Virus titer: 10e7/ml – 5 ug per vial
1ug risospeso in 50ul dH20 – concentrazione 100ng/ul

Nel caso lavorassi con le cellule posso ottimizzare il tutto trasfettando le cellule utilizzando diversi MOI, ma in questo caso io non so il numero di cellule, come procedo per ottimizzare il protollo?
E’ giusto se trasfetto 0.5ug lentivirus – 1) pezzo di tessuto e 1ug - 2) pezzo di tessuto, e controllare l’espressione del GFP tramite il microscopio a fluorescenza dopo 48-72 h?

Come faccio a sapere il numero di particelle lentivirali che ho aggiunto quando ho utilizzato la trasfezione utilizzando 0.5ug e 1ug?

A me sembra che il mio raggionamento sia del tutto sbagliato………

Grazie mille!

Martina