Spiegazione fago M13

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Flavia93
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2 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2016 : 12:50:43

Salve, sono nuova del forum e volevo chiedere a qualcuno di voi se gentilmente pu� spiegarmi il meccanismo del fago m13. In particolar modo studiando per l'esame di molecolare ho trovato degli appunti nei quali il mio professore spiega che questo fago pu� essere anche utilizzato per fare delle mutazioni sito specifiche. dice che se l'm13 � tagliato con un enzima di restrizione particolare che taglia a singolo filamento posso inserirvi all'interno un gene CDNA per l'insulina e per indurre mutazione posso creare un primer con una sequenza voluta anche se questo non si appaier� perfettamente con il cdna per il gene dell'insulina. Poi la polimerasi 1 catalizza l'aggiunta di nucleotidi a partire dal mio primer ed ottengo un m13 a doppio filamento. una volta fatti tutti questi procedimenti estraggo il cdna e lo inserisco in un vettore di espressione che mi sintetizza la proteina insulina modificata dalla mutazione che ho voluto introdurre. Quindi ad esempio ottengo un insulina che non � pi� degradata precocemente dalle proteasi. A voi torna questo ragionamento? scusate la lunghezza ma non so se ho compreso bene il meccanismo, vi ringrazio se qualcuno sa rispondermi! saluti :)