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Pipps
Utente Junior
244 Messaggi |
 Inserito il - 24 marzo 2016 : 11:11:31
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Buongiorno, da poco sto provando dei sequenziamenti manuali con metodo di Sanger per coding strand di alcuni promotori. Utilizzo un protocollo modificato che prevede una prima PCR 25X (uso la Vent-exo-DNA Pol), un secondo step di precipitazione in etanolo e risposensione e una seconda PCR con primer marcato per il singolo filamento e ddNTPs. Il problema che si è verificato è che il pattern di amplificazione è uguale per tutte e 4 le basi e non riesco a discriminarle. Ho provato introducendo lo step di precipitazione in etanolo, e per un paio di geni la cosa ha funzionato, ma cambiando gene da analizzare il problema si è ripresentato. Idee? Consigli? grazie.
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Sanger sequencing
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