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lybra.83
Nuovo Arrivato



1 Messaggi

Inserito il - 30 marzo 2007 : 10:31:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lybra.83 Invia a lybra.83 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti.In questi giorni sto eseguendo dei Western blot su linfomonociti per quantificare l'espressione di alcune proteine ma i risultati non sono incoraggianti: bande assenti e persino l'actina č poco rilevabile. Di solito uso un blocco di TTBS-latte 5% per 1h, un AbI 1:500 in TBS-latte 5% o/n e un AbII 1:2000 in TBS-latte 5%. Avete qualche consiglio? Magari per un metodo di estrazione su linfomonociti ben "collaudato" ed efficace?Grazie a tutti

Dionysos
Moderatore

D

Cittā: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2007 : 14:03:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontā e della libertā
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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domi84
Moderatore

Smile3D

Cittā: Glasgow


1723 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2007 : 16:02:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos

Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.


Quoto!Che ne dici di un 2,5% ?!

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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drophy
Nuovo Arrivato

drophy

Prov.: lecce
Cittā: copertino


11 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2007 : 19:49:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di drophy Invia a drophy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Potresti provare a diluire l'anticorpo in TBS-tween 0.1%
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gadano
Nuovo Arrivato


Prov.: Roma
Cittā: roma


22 Messaggi

Inserito il - 19 aprile 2007 : 22:58:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gadano  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di gadano Invia a gadano un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
come prepari i campioni che carichi? io posso consigliarti qualche protocollo per lisare le cellule ma prima dimmi come fai tu giusto per escludere sia quello il problema. e prova a fare la tubulina, di solito č abbastanza espressa.
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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Cittā: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2007 : 13:34:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos

Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.



d'accordissimo. Per il blocking va bene al 5%, ma per le incubazioni con gli Ab io direi di usarlo al 3%. Importantissimi i lavaggi.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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