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 Lisi alcalina per preparazione di DNA plasmidico AIUTO
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Giulia52
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2 Messaggi

Inserito il - 07 febbraio 2017 : 13:59:52  Mostra Profilo Invia a Giulia52 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, vorrei un vostro aiuto. Sto studiando la midipreparazione di DNA plasmidico, non mi è chiaro un punto:

Nella lisi alcalina dopo l'aggiunta della soluzione contenente SDS e idrossido di sodio (che determina la denaturazione delle proteine, solubilizzazione dei lipidi e quindi rottura della membrana, denaturazione degli acidi nucleici), si procede con l'aggiunta di una soluzione contenente Potassio acetato e acido acetico.
Quest'ultima determinerà :1)la rinaturazione del DNA perchè neutralizzerà il pH alcalino del precedente step, e 2) la precipitazione dell'SDS insieme alle proteine e ai detriti cellulari.

Ecco non mi è chiaro come il potassio acetato e l'acido acetico possano portare alla precipitazione dell proteine.
Potete aiutarmi per piacere?
Grazie

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1038 Messaggi

Inserito il - 07 febbraio 2017 : 23:19:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
L'SDS o sodio-dodecilsolfato è solubile in acqua soprattutto a pH leggermente basico. Al contrario il potassio-dodecilsolfato (KDS) è insolubile in acqua (e il pH acido non fa altro che ridurne ulteriormente la solubilità, oltre a neutralizzare l'NaOH nella soluzione precedente). Quindi non appena aggiungi l'acetato di potassio i complessi SDS/proteine prima perfettamente solubili ora diventano complessi KDS/proteine, precipitando istantaneamente (come vedi bene anche guardando la provetta).


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