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 Biologia Molecolare
 Congelamento-scongelamento sangue intero per estrazione DNA
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Gedy88
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4 Messaggi

Inserito il - 16 aprile 2017 : 12:03:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gedy88 Invia a Gedy88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti! Devo estrarre DNA da sangue intero EDTA congelato a -80°C. Mi chiedo se devo procedere con un protocollo di scongelamento particolare per evitare la degradazione e frammentazione del DNA o se dovrei direttamente evitare di congelare il sangue intero fino a -80°C. So che la cosa migliore è procedere all'estrazione da campione fresco o congelarlo a -20°C ma al momento ciò non è possibile.
Grazie a tutti per l'aiuto!

Andre85
Nuovo Arrivato



59 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2017 : 16:40:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Andre85 Invia a Andre85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, il tessuto ematico deve essere conservato a 4°C, gli elementi figurati una volta separati a -80 °C, così il plasma. La componente mononucleata deve essere separata subito, almeno io facevo così per gli RNA e li conservavo in TRIZOL a -80 fino ad estrazione. Il sangue non va mai congelato causa emolisi diffusa e degradazione degli acidi nucleici.
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Gedy88
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2017 : 19:03:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gedy88 Invia a Gedy88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Andrea! I kit di estrazione del DNA che utilizzo (kit commerciali MagCore, Qiagen, Roche) permettono l'estrazione da sangue intero, quindi non ho bisogno di effettuare alcuna separazione prima di procedere all'estrazione
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Andre85
Nuovo Arrivato



59 Messaggi

Inserito il - 21 aprile 2017 : 09:25:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Andre85 Invia a Andre85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, ok..io facevo tutto senza kit..stratificazione su Ficoll centrifuga e via..ma usavo ogni componente per i lavori. Io estrarrei subito, il sangue lo terrei a 4°C ma se non utilizzi soluzioni aggiuntive di nutrienti (quelle che usano i trasfusionali per esempio, ma nello specifico non mi sono mai posto il problema)le cellule entrano ovviamente in sofferenza. Se puoi estrai subito, altrimenti 4°C per 1 giorno non dovrebbe succedere nulla. Ma ti ripeto, il sangue meglio maneggiarlo fresco. Buon Lavoro!
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GFPina
Moderatore

GFPina



8329 Messaggi

Inserito il - 21 aprile 2017 : 11:00:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La resa è minore rispetto a quella del sangue fresco, ma si può estrarre benissimo anche il DNA da sangue congelato!
(parecchio) tempo fa ho estratto DNA da diversi campioni di sangue congelati a -80°C per anche una decina di anni.
Magari scongelalo gradualmente tenendolo a 4°C anziché metterlo direttamente a temperatura ambiente.
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