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 Defosforilazione con CIP
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Alberto90
Nuovo Arrivato



23 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2018 : 00:01:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Alberto90 Invia a Alberto90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buongiorno a tutti.

Sono alle prese con una ligazione che mi sta dando un pò di problemi, inserto da 1.5 kb e vettore da 2.5 kb estremità sticky. Ho fatto diverse condizioni inserto vettore e ho ottenuto diverse colonie in condizioni diverse tra loro (1:3-1:5 v/i principalmente). Tuttavia il risultato dello screening con doppia digestione è sempre negativo (vettore richiuso) e in 2 casi sembra esserci un vettore contaminante in quanto la doppia mi da pesi di vettore e inserto non conformi a quanto ligato. Stavo pensando di provare la CIP che per motivi di tempo e per aumentare la resa non ho mai usato. Che protocolli usate? Va sempre purificato il DNA dopo l'utilizzo della CIP?

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1634 Messaggi

Inserito il - 27 gennaio 2018 : 12:03:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il protocollo dipende dalla fosfatasi che usi, vedi nel datasheet. Si, va sempre purificato il DNA dopo la CIP

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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