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Alberto90
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23 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2018 : 00:01:13

Buongiorno a tutti.

Sono alle prese con una ligazione che mi sta dando un p� di problemi, inserto da 1.5 kb e vettore da 2.5 kb estremit� sticky. Ho fatto diverse condizioni inserto vettore e ho ottenuto diverse colonie in condizioni diverse tra loro (1:3-1:5 v/i principalmente). Tuttavia il risultato dello screening con doppia digestione � sempre negativo (vettore richiuso) e in 2 casi sembra esserci un vettore contaminante in quanto la doppia mi da pesi di vettore e inserto non conformi a quanto ligato. Stavo pensando di provare la CIP che per motivi di tempo e per aumentare la resa non ho mai usato. Che protocolli usate? Va sempre purificato il DNA dopo l'utilizzo della CIP?

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 27 gennaio 2018 : 12:03:54

Il protocollo dipende dalla fosfatasi che usi, vedi nel datasheet. Si, va sempre purificato il DNA dopo la CIP

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...