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kachy
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Inserito il - 18 maggio 2018 : 15:29:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kachy Invia a kachy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, mi è stato chiesto di fare un gel nativo di alcune proteine.
Vorrei sapere, come faccio calcolare i microgrammi di proteina caricati in ogni pozzetto?

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1710 Messaggi

Inserito il - 18 maggio 2018 : 19:53:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Con un dosaggio proteico come il Bradford...

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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kachy
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41 Messaggi

Inserito il - 19 maggio 2018 : 09:51:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kachy Invia a kachy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No, intendo proprio determinare i ug di campione caricati sul gel. Nel senso, se carico 10ul di campione nel gel quanti ug sto caricando?
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1710 Messaggi

Inserito il - 19 maggio 2018 : 11:47:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se dosi il campione (ad esempio col bredford) sai che è concentrato x ug/ul e lo calcoli......

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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kachy
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41 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2018 : 09:30:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kachy Invia a kachy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buongiorno, ci ho ragionato un attimo:
io ho uno stock di proteina a 50uM di un peso di 14kDa.
La formula della concertazione C = n/V può essere riscritta in termini di g/V , scomponendo il numero di moli (n = g/PM), perciò attengo che:
g/V = C*PM --> teoricamente se pongo C = 1mM allora= g/V= 1mM * 14kDa = 14mg/ml (ug/ul)

poiché il mio campione è 50uM, posso calcolare la seguente proporzione:

1000uM : 14ug/ul = 50uM : X ---> X = 0,7ug/ul

perciò se devo caricare 5ug della mia proteina nel gel dovrò calcolare:

0,7ug : 1ul = 5ug : x ---> 7.14ul di campione da caricare ( a cui dovrò aggiungere il SB)

giusto?
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