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lalery
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Inserito il - 26 novembre 2018 : 14:57:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lalery Invia a lalery un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,

volevo chiedervi aiuto circa un problema che sto riscontrando.
Da circa un annetto, in seguito ad una contaminazione tra linee cellulari, abbiamo introdotto in lab la caratterizzazione delle linee cellulari in coltura tramite il kit GenePrint 10 System (Promega), per l'analisi del profilo delle Short Tandem Repeats.

Dopo aver processato un numero pari a 400 campioni (circa 30 campioni alla volta), nell'ultima corsa di sequeziamento ho visto una forte contaminazione da Allelic Ladder in tutti i campioni. Ho provato a ripetere il tutto ricostituendo le diluizioni dei DNA, lavorando in ambienti divisi e puliti per il PRE- e il POST-PCR, con guanti, puntali, H2O, piastre... nuovi.
Niente, la contaminazione permane in alcuni campioni (ad esempio in uno dei due negativi?!).

A voi Ŕ mai successo? So che Ŕ un assay sensibilissimo, ma quello che mi sconvolge Ŕ la contaminazione da parte di un reagente che viene aggiunto come ultimo campione in piastra, senza nemmeno essere sottoposto a PCR.

Vi Ŕ mai successa una cosa simile? Come posso risolvere il problema?

Grazie mille e buon lavoro.
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