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SpaziO InfinitO
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Prov.: TO
Città: Torino


49 Messaggi

Inserito il - 04 settembre 2019 : 16:50:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpaziO InfinitO Invia a SpaziO InfinitO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao! Ho uno stock di un ligando alla concentrazione di 1 ug/10uL. Devo fare un trattamento alle cellule con questo ligando alla concentrazione finale di 30 ng/mL. Facendo i calcoli, il Volume iniziale che devo prelevare sarebbe di 0.054 uL che sarebbe troppo piccolo come volume. Quindi immagino debba fare una diluizione intermedia.

Mi potete spiegare come fare? Per favore.
Vi ringrazio in anticipo.

sofychan
Nuovo Arrivato



37 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2019 : 08:18:24  Mostra Profilo Invia a sofychan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il tuo stock è 1ug/10uL = 0.1 ug/uL = 100 ng/uL. Puoi prelevare 1 uL (=100 ng) e diluirlo a 1 mL per avere 100 ng/mL. Da qui diluisci.
Eventualmente se è piu' pratico puoi preparare soluzioni 200 ng/mL, o meglio 300 ng/mL (da cui poi fai una semplice diluizione 1:10 al tuo volume finale del pozzettto) e cosi' via.
Se il ligando è "prezioso" puoi preparare la tua diluizione stock intermedia in volumi piu' piccoli (0.5, 0.3, 0.2 mL...).
Visto che devi usare questa soluzioni come trattamento per le cellule farei una diluizione stock intermedia di ligando piuttosto concentrata, cosicchè il volume di buffer/diluente che aggiungi al terreno cellulare è di ben inferiore al 20% del totale.
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SpaziO InfinitO
Nuovo Arrivato

Prov.: TO
Città: Torino


49 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2019 : 10:47:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpaziO InfinitO Invia a SpaziO InfinitO un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da sofychan

Il tuo stock è 1ug/10uL = 0.1 ug/uL = 100 ng/uL. Puoi prelevare 1 uL (=100 ng) e diluirlo a 1 mL per avere 100 ng/mL. Da qui diluisci.
Eventualmente se è piu' pratico puoi preparare soluzioni 200 ng/mL, o meglio 300 ng/mL (da cui poi fai una semplice diluizione 1:10 al tuo volume finale del pozzettto) e cosi' via.
Se il ligando è "prezioso" puoi preparare la tua diluizione stock intermedia in volumi piu' piccoli (0.5, 0.3, 0.2 mL...).
Visto che devi usare questa soluzioni come trattamento per le cellule farei una diluizione stock intermedia di ligando piuttosto concentrata, cosicchè il volume di buffer/diluente che aggiungi al terreno cellulare è di ben inferiore al 20% del totale.



Grazie mille!! Ho capito bene, però devo adattarmi al volume finale perchè ho diversi pozzetti. Io ho provato a farlo da me il calcolo con le formule. Mi puoi dire se ho fatto correttamente?

Stock: 1 ug/10 uL = 0.1 ug/uL, faccio una soluzione intermedia con diluizione 1/300, quindi prelevo dallo stock 3 uL in 1 mL (così ho 0.0003 ug/uL.

Poi siccome mi servono 18 mL finali contenenti questo ligando a 30 ng/mL, procedo trasformando tutto in ug/uL e mL in uL:

Vi = (0.00000003 ug/uL * 18000 uL)/(0,0003 ug/uL)=1.8 uL

Quindi dalla soluzione intermedia prelevo 1.8uL in 18 mL finali per avere 30 ng/mL.

E' corretto? Grazie mille

Il sapere non viene da solo, bisogna ricercarlo.
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sofychan
Nuovo Arrivato



37 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2019 : 13:38:52  Mostra Profilo Invia a sofychan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Allooora un attimo.. Si' ovviamente dipende dal volume finale di medium che devi aggiungere ai pozzetti.
Se dalla tua soluzione 0.1 ug/uL (= 100 ng/uL) vuoi fare una diluzione precisa 1:300 dovresti fare 3 uL in 900 uL. Otterresti una soluzione 0.33 ng/uL (=330 ng/mL).
Se porti 3 uL a 1000 uL è una diluizione 1:333 = 0.3 ng/uL (=300 ng/mL)di soluzione finale.
E' una sottigliezza ma essere precisi a queste concentrazioni basse è meglio

Quindi hai ora la tua soluzione 0.3 ng/uL (=300 ng/mL).
Ti servono 18 mL a 30 ng/mL. 30 ng/mL è praticamente la diluzione 1:10 di 300 ng/mL.
Ergo, dovresti diluire la tua soluzione 300 ng/mL 1:10 in in volume finale di 18 mL: cio' corrisponde a 1.8 mL della tua soluzione di ligando + 16.2 mL medium.
Se vuoi vederlo come formula C1V1 = C2V2 corrisponde a 300ng/mL*XmL = 30ng/mL*18mL; x=1.8 mL
Magari ricontrolla e in caso correggimi se sbaglio
Controlla bene le unità di misura e cerca di convertire a quella piu' "maneggevole". In questo caso per me è ng/mL visto che è anche l'unità di misura della concentrazione finale richiesta, e senza tanti decimali è un po' piu' semplice vedere subito quali conti devi fare.
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