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 Cellule U2OS. Consigli per la crescita?
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Weathertie
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1 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2019 : 11:36:56  Mostra Profilo Invia a Weathertie un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti!
Da qualche giorno sto cercando di far crescere cellule U2OS ma con risultati scarissimi. Quelle che ho piastrato ieri oggi sono cresciute pochissimo e, anzi, paiono essere meno.
Il terreno è fatto con DMEM, sodio piruvato, glutammato, FBS e pen/strept. Online ho trovato solo qualche variazione del tema, più la regolazione della CO2. Voi avete consigli?
Inoltre, per staccare le U2OS dalla petri basta un'azione meccanica come con le HEK oppure bisogna usare tripsina?
Grazie mille

sofychan
Nuovo Arrivato



37 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2019 : 13:45:40  Mostra Profilo Invia a sofychan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Questa linea cellulare non mi è molto familiare, ma ATCC consiglia di usare McCoy's 5a medium. Hai la possibilità di provarlo? O di confrontarlo con DMEM per vedere cosa potresti aggiungere? (in genere DMEM va bene per iniziare, con i dovuti accorgimenti)
ATCC dice anche che sono aderenti -> tripsinizzare per i passaggi. Tra l'altro anche le HEK sono aderenti mi pare, no? In ogni caso controlla bene il produttore della tua linea cellulare cosa consiglia per passare le cellule. Rimuovere le cellule per azione meccanica invece che per via enzimatica puo' in certi casi danneggiare le cellule.
Alcune linee cellulari ci mettono un po' a riprendersi dopo averle scongelate e crescono lentamente, se non sei sicura mettile in una T25, cambia il medium ogni 2-3 giorni e aspetta almeno una settimana.
Se hai la possibilità controlla se la vial che hai scongelato era contaminata da micoplasma.
Se le cellule sono particolarmente sensibili al pH (magari cerca un po' online) puoi eventualmente considerare di aggiungere un po' di HEPES per aumentare la buffering capacity, o altrimenti variare la quantità di bicarbonato o percentuale di CO2.
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