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 problemi con PCR e Sanger
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sunnym
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Inserito il - 16 novembre 2019 : 13:12:35  Mostra Profilo Invia a sunnym un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buongiorno ragazzi,
Sto riscontrando problemi con la PCR di alcuni campioni. Il gene e l’esone, quindi il primer, è lo stesso ma il campione è differente. Alla stessa temperatura di melting e con gli stessi cicli di amplificazione alcune vengono, con una bella banda, e altre invece no. Quale può essere il problema? La concentrazione del DNA è più o meno la stessa di tutti i campioni che sto analizzando quindi non credo neanche sia quello il problema, inoltre non è un degradato.
Colgo l’occasione per chiedere come mai, da una bella banda di PCR, non riesco a sequenziale al Sanger. L’eletttoferogramma è assente, mi da solo i picchi di formammide. Inutile dire che il campione l’ho messo nelle varie fasi, l’ho fatto due volte, e che la reazione di sequenza è stata fatta. Potrebbe essere utile allungare la fase di elongation? Anche se il frammento non è molto lungo... grazie :)
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