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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
 Inserito il - 24 aprile 2007 : 10:03:38
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ciao sto facendo la tesi.
sto usando vari fissativi su cellule del brain dissezionate. dopo faccio un'immunofluorescenza per una certa proteina e con la paraformaldeide 10 minuti at RT vedo una certa morfologia, mentre con etanolo 100% 5 min + acetone 5 min ne vedo un'altra. si tratta delle stesse cellule o no?
e' un problema del fissativo e se si', che alternative ho di fare altre fissazioni? bisogna tener presente che non posso usare la paraformaldeide perche' devo usare l'LCM.
grazie x l'aiuto!
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 24 aprile 2007 : 13:27:42
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Rispondo prima a domi84: un fissativo è una sostanza che viene usata per preparare tessuti o cellule prima di tecniche quali l'immunoistochimica e che "blocca" e stabilizza le cellule nel loro stato al momento del fissaggio. Una volta che hai fissato un tessuto lo puoi tagliare in fettine e mettere su di vetrini da microscopio e questo resisterà per anni senza problemi (mentre un tessuto fresco non fissato non durerebbe). Ovviamente il trattamento con queste sostanze uccide le cellule.
Solitamente se lavori su fettine di tessuto usi la parafolmaldeide, mentre per le colture cellulari si usa metanolo (spesso combinato con etanolo), acetone o anche PF.
Per rispondere a elly... che io sappia la morfologia non dovrebbe essere grandemente alterata. Non so bene come funzioni l'acetone, ma la PF denatura in parte le proteine, quindi potrebbe esserci un minimo di cambio morfologico. Noi lavoriamo su fettine di cervello e non abbiamo mai avuto problemi del genere (le cellule fissate hanno lo stesso aspetto di quelle vive)... |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 24 aprile 2007 : 17:50:46
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Io so che l'acetone ha anche una azione permeabilizzante e per alcuni anticorpi va meglio, noi preferiamo usare l'acetone rispetto alla PFA, ma cambiamenti di morfologia non ne ho mai visti.
Ho solo notato differenze negli staining con antocorpi in immunofluorescenza! |
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pitt_323
Utente Junior
Prov.: Modena
Città: Modena
226 Messaggi |
Inserito il - 25 aprile 2007 : 00:00:31
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Io ho fatto mesi e mesi nei laboratori di istochimica ed immunoistochimica nel reparto di anatomia patologica del Policlinico di modena,li si usa la formaldeide al 10 %. Cmq si, se usati non correttamente (dal punto di vista delle concentrazioni,delle tipologie di tessuti da utilizzare, e dal tipo di colorazione che vuole essere fatta successivamente) possono cambiare la morfologia o a volte addirittura far "perdere" ciò che serve (ad esempio se devono essere fatte indagini sui lipidi,i fissativi alcolici possono compromettere il tutto).
Ti consiglio magari di dare un'occhiata al Pasquinelli. Ciao |
Vandini Pietro |
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i fissativi cambiano la morfologia delle cellule?
Didattica e Relazioni
