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Autore

Discussione

caralinda79
Nuovo Arrivato

Città: firenze

21 Messaggi

Inserito il - 02 maggio 2007 : 11:58:15

Salve!
ho un problema...aiutatemi a risolverlo se potete!
ho purificato da gel il dna con un kit della quiagen (colonnine
di silice). Durante la purificazione non ho eliminato bene
l'etanolo e quando ho eluito il dna è venuto giù anche parecchio
etanolo. Risultatato:lo spettrofotometro mi da un rapporto 260/280
altissimo (3-7).
Domanda:
1)è attendibile la lettura della concentr azione di dna?
2)il dna mi serve per fissarlo su una membrana di nylon, non per
fare ulteriori reazioni perciò l'etanolo dovrebbe evaporare.
Me lo confermate?

non ho molto dna, quindi eviterei ulteriori passaggi, tipo precipitazione o nuova purificazione su colonna.

Grazie in anticipo!
caralinda79

Balsamo del Canadà
Nuovo Arrivato

Prov.: Verbano-Cusio-Ossola
Città: Verbania

97 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2007 : 10:54:20

Non so se potrò esserti di aiuto.. Non vorrei sbagliare ma mi sembra di ricordare che la lettura 260/280 serva a verificare la purezza del campione in riferimento a proteine o altro. Non mi sembra che l'etanolo, usato appunto per i vari lavaggi nelle purificazioni, dia disturbo in quel senso. Per la quantificazione, proprio dopo la purificazione da gel con lo stesso kit, usavo il "PicoGreen" che è altamente selettivo per acidi nucleici. Essendo tale la quantificazione non dovrebbe essere "disturbata da etanolo" ma semplicemente il campione sarà più diluito. Il che non è un bene lo stesso visto che io in alcuni casi facevo una fatica immane a purificare da gel e non mi rimaneva niente.
L'etanolo mi ricordo che si poteva far evaporare in un thermoblock tipo a 70°C per qualche minuto. Cmq i filtri vengono fatti essicare se non mi sbaglio quindi l'etanolo dovrebbe evaporare senza problemi. Ma un blotting non l'ho ancora fatto di persona quindi potrei sbagliare.
Ti consiglierei di controllare sul manuale del kit e cmq prendere con le pinze le mie parole!
Ciao

-B.del C.-