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Discussione |
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Ele Ele
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Trezzano Rosa
17 Messaggi |
 Inserito il - 06 giugno 2007 : 20:37:59
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Ciao a tutti...
qualcuno sa per caso spiegarmi come si fa praticamente, in laboratorio un cariotipo???
Grazie..
ele 
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2007 : 21:49:57
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Durante le lezioni di citogenetica mi han dato un protocollo di questo tipo,
ma io non l'ho mai messo in pratica:
- Si instaura una coltura primaria a partire dal sangue,
dai fibroblasti, dagli amniociti o dalle cellule dei villi coriali
- Si somministrano degli agenti mitogeni (citochine)
- Si applica un trattamento con colchicina (farmaco derivato del colcemide)
che causa la paralisi della polimerizzazione microtubulare: circa il 5-6%
risulteranno bloccate in metafase, se tutto è stato fatto correttamente.
- Centrifugazione e recupero cellule
- Fissazione con metanolo e acido acetico
- Sospensione del pellet in una soluzione ipotonica
al fine di “gonfiare” le cellule e farle scoppiare
- Colorazione mediante un qualsiasi metodo di bandeggio
(oppure trattamento con sonde per chromosome painting)
- Osservazione dei cromosomi al microscopio e fotografia
Alla fine ritagli le varie fotografie ottenute
e ti ritrovi con una situazione di questo genere:
A questo punto non resta che mettere un po' d'ordine,
cercando di riconoscere ciascun cromosoma in base al
suo specifico bandeggio oppure al suo specifico colore
(quest'ultimo caso solo se hai fatto chromosome painting)
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Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Ele Ele
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Trezzano Rosa
17 Messaggi |
Inserito il - 07 giugno 2007 : 20:21:38
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Ciao..ti ringrazio tanto!!
ti chiedo un ultima cosa..
servono dei microscopi particolari?
Grazie ancora
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 08 giugno 2007 : 00:10:09
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Non ne ho idea |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Dafne
Nuovo Arrivato
Prov.: Enna
11 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2008 : 13:19:03
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Ciao a tutti,
qualcuno saprebbe rispondere alla seguente domanda?
1) Descrivete la tecnica del “chromosome painting”
attendo risposta, grazie |
Grandi sono coloro che sanno progettare il loro futuro in meglio, senza paura dei rischi e delle difficoltà che esso comporta! |
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Simona84
Utente Junior
Città: milano
131 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2008 : 20:13:45
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il procedimento spiegato da Dionysos è abbastanza corretto a parte che il passaggio di fissazione e ipotonica devono essere invertiti.
il cariotipo poi normalmente viene valutato mediande il bandeggio Q che si fa semplicemente immergendo il vetrino nella mostarda di quinacrina per 2-3 secondi e poi il vetrino viene sciacquato in un buffer(McIlvaine) e montato con un vetrino coprioggetto. i microscopi utilizzati sono a fluorescenza e il bandeggio Q viene valutato con un filtro ad una particolare lunghezza d'onda (fitc).le metafasi cmq sono visibili anche al microscopio a contrasto di fase prima della colorazione ma qui non è possibile fare un cariotipo, in quanto i chr non sono riconoscibili senza bandeggio.se poi si vuole aumentare la risoluzione o indagare alcune caratteristiche specifiche ci sono altri tipi di colorazione, tipo bandeggio G, C, R e colorazione DA-DAPI.
Per quanto riguarda il chromosome painting invece significa utilizzare delle sonde specifiche per tutto il cromosoma di interesse(è una miscela di sonde). si fa una FISH con queste sonde e poi a microscopio si vedrà il chr di interesse "dipinto" in base al fluoroforo utilizzato per marcare la sonda. di solito il painting si utilizza a seguito del bandeggio Q per identificare con maggior precisione o per confermare un riarrangiamento cromosomico oppure una delezione. in commercio sono disponibili i painting di tutti i chr e c'è anche una tecnica che si chiama SKY che si basa sul painting e che permette di riconoscere contemporaneamente tutti i chr!
spero di essere stata abbastanza chiara!!
ciaoo |
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Dafne
Nuovo Arrivato
Prov.: Enna
11 Messaggi |
Inserito il - 13 aprile 2008 : 15:51:36
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| Grazie mille. Tutto chiaro!! |
Grandi sono coloro che sanno progettare il loro futuro in meglio, senza paura dei rischi e delle difficoltà che esso comporta! |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 13 aprile 2008 : 18:07:08
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Immagine:
131,59 KB
giusto per completezza ho messo apposto i cromosomi (o almeno credo che siano corretti,anche perche' questo bandeggio non e' il massimo),cmq...e' un maschio |
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Simona84
Utente Junior
Città: milano
131 Messaggi |
Inserito il - 13 aprile 2008 : 18:30:29
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secondo me i 17 sono invertiti con i 18 terza riga ultima coppia 18 e quarta riga prima coppia 17).nella 4 riga la seconda coppia dovrebbero essere dei venti e l'ultima coppia i 19. sugli acrocentrici ho qlc dubbio perchè non si vede bene il bandeggio (anche se scambierei i 13 coi 14). cmq ha ragione patrzio il bandeggio non è per nulla il massimo!
ciao! |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 13 aprile 2008 : 18:36:56
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onestamente mi stavo scocciando e li ho solo accoppiati....infatti ai primi c ho messo un po' piu' d attenzione |
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Simona84
Utente Junior
Città: milano
131 Messaggi |
Inserito il - 13 aprile 2008 : 18:47:29
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no infatti io vista la qualità del bandeggio non mi sarei nemmeno messa!!però visto che te avevi già fatto la gran parte del lavoro io ho solo fatto qlc correzione
ciao! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 14 aprile 2008 : 01:02:57
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Solo perché è bella e visto che era la domanda fatta Dafne aggiungo l'immagine del chromosome painting
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pecarlo
Nuovo Arrivato
Prov.: Caltanisetta
Città: caltanissetta
24 Messaggi |
Inserito il - 04 giugno 2008 : 17:44:31
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Ma quindi la tecnica del chromosome painting in cosa consiste????
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