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javier4
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
8 Messaggi |
 Inserito il - 12 gennaio 2005 : 21:36:37
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ciao a tutti, ki mi puo' procurare un protocollo di estrazione di rna da tessuto? grazie anticipatamente CIAO
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 13 gennaio 2005 : 20:07:41
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Che tipo di tessuto?
Ci sono dei kit proprietari specifici, puoi trovare diversi protocolli qui. |
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Marianna
Utente Junior
146 Messaggi |
 Inserito il - 15 gennaio 2005 : 17:45:36
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Ciao, puoi provare questo protocollo..io l'ho usato per estrarre da materiale vegetale ma credo vada bene un pò in generale.
Si avvale dell'uso della miscela di estrazione TRI REAGENT.
- Prelevare 1 ml della miscela di estrazione e porla in contatto con il tessuto.
- Lasciare a gire 5 min a T amb
- Aggiungere 200 microlitri di cloroformio
- Agitare e poi vortexare per 15 sec
- Lasciare 2 min a T amb e poi centrifugare a 13.000g per 15 min a 4°C
- Prelavate l RNA,che si trova nella parte superiore della eppendorf, e aggiungere 500 microlitri di isopropanolo e vortexare
- Lasciare5 min a T amb e poi centrifugare a 13.000g per 8 min a 4°C
- Rimuovere il surnatante e risospendere il pellet, che è proprio l'RNA, in 1 ml di etanolo al 75%
- Centrifugare a 13.000g per 5 min a 4°C
- Rimuvere l'etanolo e lasciare asciugare le eppendorf all'aria (sotto cappa)rovesciate a testa in giù su un foglio di carta da filtro
- Risospendere nel buffer della DNAsi
- Se non si risospende bene, mettere il campione in un bagnetto a 55°C per circa 15 min, in quanto il calore favorisce la solubilizzazione
- Aggiungere la DNAsi
- Incubare per 1h a 37°C
- Spinnare velocemente e aggiungere 30 microlitri di acqua bidistillata sterile
- Aggiungere un uguale volume di fenolo-cloroformio-alcol isoamilico (1:1:24) e vortexare
- Centrifugare velocemente e recuperare la fase acquosa
- Porre la suddetta fase in una eppendorf pulita e aggiungere un uguale volume di cloroformio-alcol isoamilico (24:1)
- Vortexare e centrifugare per 4 min
- Prelevare la fase acquosa in cui si trova l'RNA
Se non si può fare subito la corsa elettroforetica si deve conservare congelando a -80°C.
Ovvio che tutto ciò ke va usato per lavorare con l'RNA dalle soluzioni alla plasticheria/vetreria deve essere autoclavato per garantire la maggiore sterilità possibile. Bisogna sempre lavorare con i guanti.
Ciao ciao.
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Farah |
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javier4
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
8 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2005 : 16:45:49
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| GRAZIE PER L'AIUTO AD ENTRAMBI, A BUON RENDERE CIAOOOOO |
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