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Autore

Discussione

vera83
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: milano

1 Messaggi

Inserito il - 15 giugno 2007 : 10:21:01

Ciao a tutti, ho un grosso problema e spero che qualcuno di voi possa aiutarmi a risolverlo. Sto coltivando la linea cellulare Cos-1 che utilizzo per trasfezioni con lipofectamina, seminandole in multiwell da 6. Puntualmente qualche ora dopo la trasfezione compaiono nei tre pozzetti in basso della piastra dei "fagioli", zone del pozzetto in cui tutte le cellule muoiono e al microscopio ottico si vedono come si fossero raggrinzite. A questo punto ho provato a:
cambiare il tipo di multiwell, pensando fosse la plstica, con 5 tipi di marche differenti
cambiare lotto di lipofectamina
cambiare posizione della multiwell nell'incubatore
cambiato linea cellulare, a usare le HeLa
nessuno di questi espedienti � servito. Da notare che il problema si ripropone sempre nei soliti tre pozzetti in basso e sempre usando le multiwell, mentre nelle petri non succede.
Avete suggerimenti? Ve ne sarei grata.

zio
Utente Junior

Citt�: Napoli (IRAQ)

120 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2007 : 18:14:33

solo nei pozzetti di sotto?????????

non so che dirti, a volte si tratta solo di un fatto meccanico.
per esempio hai provato ad aggiungere i componenti facendoli scorrere con la punta della pipetta, sulla parete del pozzetto? sei sicura che l'incubatore sia in "bolla".

facci sapere se hai risolto!!

zio

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2007 : 23:17:29

Se metti due piastre nell'incubatore una con la parte alta verso il fondo e l'altra con la parte alta verso la porta dovresti capire se � un problema dell'incubatore o delle tue piastre.

Di solito queste cose succedono con le piastre con molti pozzetti dove spesso i pozzetti ai bordi non hanno il fondo esattamente piatto.Con le piastre da 6 per� mi sembra strano.

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