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chiaretta
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2007 : 19:02:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chiaretta Invia a chiaretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve
qlc saprebbe per caso dirmi come si dimostra tramite l'impiego di tre sonde la riduzione dell'espressione di c-myc in cellule cancerose trattate con ornitina decarbossilasi e cosa c'entrano gli esperimenti con i due vettori PTZ18R e PTZ19R???????

1 grazie anticipato

Dea
Nuovo Arrivato

0214_da_duch

Prov.: Caserta
Citt: Casapulla


17 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2007 : 20:11:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dea  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dea Invia a Dea un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ehi signorina visto che mi hanno dato delle rispodste esaurienti ne approfitto che male c'è a beneficiare dell'erudizione altrui???
Vabbè un bacio bella

Ransie Biotech
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chick80
Moderatore

DNA

Citt: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2007 : 22:38:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non che hai un link ad un articolo o simile in cui fanno questo esperimento... detto cos un po' difficile da capire, non proprio un esperimento standard che fai tutti i giorni in laboratorio.

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GFPina
Moderatore

GFPina

Citt: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2007 : 00:21:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Potrebbe essere questo l'articolo???

Characterization of an endogenous RNA transcript with homology to the antisense strand of the human c-myc gene - PubMed

Characterization of an endogenous RNA transcript with homology to the antisense strand of the human c-myc gene - PDF

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chiaretta
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2007 : 10:29:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chiaretta Invia a chiaretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
l'ha spiegato il prof a lezione e purtroppo i miei appunti sn alquanto 1 disastro , ho intravisto l'articolo di GFPina x nn mi sembra faccia riferimento alle sonde utilizzate x dimostrare l'esistenza del frammento di 400 nucleotidi. Praticamente il prof ha detto ke x dimostrare la riduz dell'espressione di c-myc in cellule COLO 320 trattate cn ornitina decarbossilasi si utilizzano 3 sonde marcate radioattivamente: 1 si appaia cn l'intero gene (c-myc) e rivela 1 riduz del segnale radioattivo rispetto al controllo e la presenza di un frammento di 400 nucleotidi, la sonda II si appaia con l'esone 3 rivelando sl 1 ridiz del segnale radioattivo e nn il frammento di 400 nucleotidi e la sonda III si appaia cn l'introne 2 rivelando sl la presenza del frammento di 400 nucleotidi ma nn la riduz del segnale radioattivo...Nn ho capito a cs siano dovuti qst risultati n tantomeno l'esperimento in vitro volto a dimostrare il xk dell'esistenza del frammento di 400 nucleotidi tramite l'utilizzo dei due vettori PTZ18R e PTZ19R. alquanto complicato o almeno cos mi sembra x cui se riusciste a raccapezzarvi in qst confusionaria spiegaz ke ho dato sarebbe fantastico
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GFPina
Moderatore

GFPina

Citt: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2007 : 13:20:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da chiaretta

ho intravisto l'articolo di GFPina x nn mi sembra faccia riferimento alle sonde utilizzate x dimostrare l'esistenza del frammento di 400 nucleotidi.

Come no! Guarda la figura 1!

Se leggi con calma l'articolo c' spiegato proprio quello che hai chiesto!

Comunque: innanzitutto le cellule COLO 320 non sono trattate con ornitina decarbossilasi, ma con DFMO che un inibitore della ornitina decarbossilasi.

Per le sonde esattamente come hai scritto:

Citazione:
si utilizzano 3 sonde marcate radioattivamente: 1 si appaia cn l'intero gene (c-myc) e rivela 1 riduz del segnale radioattivo rispetto al controllo e la presenza di un frammento di 400 nucleotidi, la sonda II si appaia con l'esone 3 rivelando sl 1 ridiz del segnale radioattivo e nn il frammento di 400 nucleotidi e la sonda III si appaia cn l'introne 2 rivelando sl la presenza del frammento di 400 nucleotidi ma nn la riduz del segnale radioattivo

Dalla figura dell'articolo si capisce meglio, comunque:
  • sonda I: un grosso frammento che contiene sia esoni che introni e riconosce sia il trascritto di c-myc che il frammento da 400nt

  • sonda II: localizzata alla fine e si appaia con l'esone 3 di c-myc, riconosce quindi c-myc ma non il frammento da 400nt

  • sonda III: localizzata nell'introne 2, riconosce il frammento da 400nt ma non c-myc (perch non riconosce esoni)


Citazione:
...Nn ho capito a cs siano dovuti qst risultati n tantomeno l'esperimento in vitro volto a dimostrare il xk dell'esistenza del frammento di 400 nucleotidi tramite l'utilizzo dei due vettori PTZ18R e PTZ19R.

Questi vettori sono utilizzati per fare sonde "strand-specifiche", cio in grado di discriminare tra senso e antisenso.
  • Sonde prodotte dal vettore PTZ18R-myc riconoscono il trasctitto "senso"
  • Sonde prodotte dal vettore PTZ19R-myc riconoscono il trasctitto "antisenso"

Si hanno questi risultati:
  • La sonda prodotta da vettore PTZ18R-myc riconosce un frammento da 2.2kb che il trascritto di c-myc
  • La sonda prodotta dal vettore PTZ19R-myc riconosce il frammento da 400nt che quindi "antisenso" !!!


Ti consiglio comunque di leggere l'articolo, con questa spiegazioni non dovresti avere problemi a capire!

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chiaretta
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2007 : 13:31:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chiaretta Invia a chiaretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Oh yeeahh
grazie
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Dea
Nuovo Arrivato

0214_da_duch

Prov.: Caserta
Citt: Casapulla


17 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2007 : 17:49:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dea  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dea Invia a Dea un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ehi chiaretta mi sn appena messa al pc a quanto vedo dovrebbe essere chiaro l'articolo?!Speriamo un bacio bella

Ransie Biotech
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