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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
 Inserito il - 03 luglio 2007 : 11:16:22
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ciao a tutti!
devo in teoria marcare un peptide di pochi aa (20) per vederlo con CSLM (confocal scanning laser microscopy) su una superficie minerale o su cellule epiteliali..che cosa potrei utilizzare per renderelo flourescente?
ho trovato GFP e' 250 aa e diventa troppo costosa perceh' il peptide nn e' ricombinante ma e' prodotto sinteticamente...che cosa mi sapete suggerire a riguardo?
Gli anticorpi son troppo ingombranti?devo infatti vedere quanto in profondita' o se fa del tutto attraverso lo strato di cellule epiteliali e gli anticorpi potrebbero essere troppo grandi rispetto al peptide..che ne pensate?
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 11:31:31
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hanno delle lisine? o delle cisteine?
marcali con cy3, cy5, o qualke alexafluor(molecular probes-invitrogen)... |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 11:46:01
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si,ha una lisina..grazie mille del suggerimento!!!!!!ora guardo un po' in internet quel che hai detto...
per caso il radiolabelling e' una cavolata?nn e' fluorescente quindi...nn c'entra con CLSM vero? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 13:23:29
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Ma ti consiglio la fluorescenza!!! Lascia perdere il radioattivo se puoi! 
Concordo con Alexo, su invitrogen potresti trovare quello che fa al caso tuo!
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 13:24:46
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| ok!!!grazie mille per le dritte!!! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 14:53:03
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Prima di marcare controlla quali laser hai sul confocale: non vuoi marcare con un fluoroforo che poi non puoi eccitare!
Concordo per il radioattivo: lascia perdere se possibile, e comunque non sarebbe rilevabile con il confocale. |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 19:46:51
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| ok,grazie chick! |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 22:24:41
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"Gli anticorpi son troppo ingombranti?devo infatti vedere quanto in profondita' o se fa del tutto attraverso lo strato di cellule epiteliali e gli anticorpi potrebbero essere troppo grandi rispetto al peptide..che ne pensate?"
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Gli anticorpi vanno benissimo!
Non sono troppo ingombranti...
Resta chiaro che devi fissare le cellule prima di fare un Immunofluorescenza...
...il metodo di fissazione va fatto in base al bersaglio che vuoi visualizzare altrimenti rischi di non vedere niente... ( es.Metanolo-acetone, paraformaldeide, triton x100, ecc...), ricorda che in fondo il bersaglio è l'origine del segnale.
C'è un anticorpo che becca le his, altri le cys ecc. Quello in commercio già fluorescinato funziona benissimo.
Alexa Fluor è una marcatura che non sempre ha un intensità di fluorescenza ottimale.
Ciao
-Lorenzo-
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www.tlbspazio.it
Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 23:49:06
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| ok...consulto un pò e possibilità grazie mille Aureus!! |
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